Protein G Agarose

背景^[1-7]

Protein G Agarose(Fast Flow,5ml)预装柱是一种简便、快速、高效的用于抗体纯化、免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)或免疫共沉淀(Co-IP)的即用型预装柱，也称层析柱(Chromatography column)或纯化柱(Purification column)。也可用于实验中抗原抗体复合物的分离纯化。天然蛋白A（Protein A）是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白，天然蛋白G（Protein G）是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白，二者功能相似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG。

然而两者结合特异性上有所不同,如蛋白G对人IgG3，大鼠IgG2a，绵羊IgG1具有很高的亲和力，但蛋白A对这些Ig结合力很弱。蛋白A，蛋白G常共价偶联在固体载体如琼脂糖珠或丙烯酸树脂小珠上，直接用以做免疫沉淀（IP）或者免疫共沉淀（Co-IP）来进行蛋白功能相关研究，或者直接装在层析柱上来纯化单克隆或者多克隆抗体。

Protein G Agarose(Fast Flow,5ml)预装柱使用的是基因改造后的蛋白A和蛋白G，不仅维持其本身的Ig亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合。本品同时将蛋白A和蛋白G共价偶联到琼脂糖凝胶微球表面，比单独的蛋白A或者蛋白G都有更广的结合范围，适合于所有蛋白A琼脂糖珠和蛋白G琼脂糖珠单独可以结合的Ig，实用性更高。

Protein A是一种发现于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的细胞壁表面蛋白，分子量为42kDa；Protein G是C型或G型链球菌(Streptococcal bacteria)表达的免疫球蛋白结合蛋白。Protein A和Protein G功能相似，能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)结合，结合的部位通常为免疫球蛋白的Fc区，但有资料显示Protein A也会和人VH3家族的Fab区结合，而Protein G有时与Fab区也有一定结合。同时，两者对于不同的免疫球蛋白亚类的结合能力有所不同。适当重组改造的Protein A、G与琼脂糖凝胶(agarose)以一定的方式结合，可用于抗体的纯化.

应用^[8][9]

Protein G Agarose(Fast Flow,5ml)预装柱可用于纯化IgG：

在蛋白质组学研究的很长时间内,天然多肽被视为体内代谢的生物垃圾。最近几年很多研究者发现,多肽作为蛋白代谢产物,反映了体内生物代谢过程。多肽组是疾病标志物的重要的宝库,对于肿瘤的早期预警、早期诊断具有重要的研究意义。肝癌作为世界范围内高发病率疾病,引起众多研究者的关注,其在亚洲,具有与乙肝、肝硬化等密切联系的疾病特点,因此肝癌的早期预警技术研究对于预防肝癌、预测肝癌的发病趋势具有特殊的研究价值和社会意义。

目前,用于临床确诊的肝癌标志物主要还是甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP)、鳞状细胞癌抗原免疫球蛋白M复合物(SCCA-IgM IC)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)及其他联检标志物,最常用的AFP诊断方法对于直径3cm以下的肿瘤具有诊断局限性。采用传统的单克隆抗体制备方法制备出2种多肽单克隆抗体:抗SP0104抗体、抗SP0105抗体,在此基础上使用Protein G Agarose建立了基于多肽抗体和MALDI-TOF-MS的免疫质谱方法,使用该方法对两种多肽标准品SP0104、SP0105进行检测,偏差小于0.5Da。

结果表明,优化后的免疫质谱方法适用于血清低浓度多肽的检测。最后我们比较了有机溶剂沉淀、超滤、去除IgG和白蛋白、解离白蛋白连接的多肽等4种血清多肽预处理方法和不处理对免疫质谱检测结果的影响,结果表明不处理时标志物检测值最高。采用通过优化的免疫质谱方法完成对20例正常血清、20例肝癌血清的检测,结果两组质谱峰强度检测值经过t检验,P<0.003,两组检测值具有显著性差异。结果表明免疫质谱方法可用于肝癌多肽血清标志物的诊断研究。

参考文献

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