一种软毛青霉酸的液质联用检测方法

背景技术

软毛青霉酸具有七元环酚酮结构，是由红曲发酵过程中受青霉菌污染产生的一种此生代谢产物，具有一定的抗虐活性，同时又具有一定的肾毒性。检索仅一篇文献报道^[2]采用高效液相色谱法紫外检测器对软毛青霉酸进行色谱分离纯化，制备得到高纯度化合物后使用高分辨质谱负离子模式测定其分子量，利用核磁共振谱鉴定结构。

软毛青霉酸在文献中共报道有2种结构，分子量相同，互为同分异构体，主要经烯醇式互变异构产生(参见文献[3])。由于红曲的安全性引起高度重视，因此需要开发灵敏度高，专属性好的分析测试技术检测软毛青霉酸的含量。

检测方法

(1)混合1g红曲米粉末和100mL甲醇浓度为50％的甲醇水溶液，并依次进行10000rpm均质2min和4℃温度下、15000rpm离心10min，离心后的上清液即为所述含软毛青霉酸样品；

(2)按照体积比为1:5混合浓度为2mol/L三甲基硅烷化重氮甲烷溶液(溶剂为正己烷)和含软毛青霉酸样品，得到混合样，并进行30℃、300rpm震荡30min，然后按照体积比为1:6混合乙酸和所述混合样进行淬灭，并采用40℃氮气吹干以进行干燥，得到的固相采用500μL甲醇的浓度为10wt％的甲醇水溶液进行复溶，并经过滤，所述过滤的液相即为衍生化样品；

(3)对所述衍生化样品进行液质联用检测，得到所述红曲中软毛青霉酸含量；

其中，色谱柱包括C8色谱柱，色谱柱温度为35℃，色谱柱的规格为粒径2.6μm，内径2.1mm，长100mm，进样体积为2μL，流动相的流速为0.3mL/min；

所述液质联用检测的流动相包括第一相和第二相，其中所述第一相为甲酸铵的浓度为10mmol/L的甲酸铵水溶液；所述第二相为甲酸铵的浓度为10mmol/L的含有甲酸铵的甲醇水溶液；含有甲酸铵的甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为1:1；

检测得到的质谱图如下图所示，其中A为无软毛青霉酸的出锋图，B为软毛青霉酸自身的出峰图，C为含软毛青霉酸的红曲样品的出峰图，从图中可以看出，软毛青霉酸两种异构体衍生物峰型尖锐，分离良好，质谱响应好[1]。

参考文献

[1]杭州市食品药品检验科学研究院(杭州市药品与医疗器械不良反应监测中心). 一种软毛青霉酸的液质联用检测方法:CN202411309902.3[P]. 2024-12-13.

[2]Masato Iwatsuki(Masato I ,Shohei T ,Mihoko M,et al .In vitro and in vivo antimalarial activity of puberulic acid and its new analogs,viticolins A‑C，produced by Penicillium sp.FKI‑4410.[J].The Journal of antibiotics,2011,64 (2):183‑8.

[3]Masato I,Shohei T,Mihoko M,et al.In vitro and in vivo antimalarial activity of puberulic acid and its new analogs,viticolins A‑C,produced by Penicillium sp.FKI‑4410.[J].The Journal of antibiotics,2011,64(2):183‑8.以及Halton B,Harvey J.Electrocyclic Ring‑Opening Reactions of gem‑Dibromocyclopropanes in the Synthesis of Natural Products and Related Compounds[J].Synlett,2006,2006(13):1975‑2000.