叶酸杂质C的一种高效液相检测方法

背景技术

叶酸不能在人体合成，只能通过食物或膳食补充剂摄取。叶酸的有关物质主要是合成过程中残留的原料、未反应完的中间体、反应副产物及降解杂质，其分析方法也多有报道。叶酸在空气中相对稳定，紫外光照后易降解，在中性和碱性条件下稳定，在热的酸性溶液中不稳定。故合成的叶酸产品纯度不高，而杂质的存在可能会引起毒副作用。叶酸杂质C作为叶酸的杂质存在，在化学性质上与叶酸相似，但可能具有不同的生物活性和毒性。

为了保证药物的安全有效，需要对药物中的有关杂质进行研究、检测和监控。现有技术中，《中国药典》2020版、《美国药典》43版和《英国药典》2020版等药典标准均记载有叶酸及其杂质采用高效液相色谱法进行分析测定。但是根据目前现有药典标准记载的方法进行检测分析，存在主成分与杂质分离度不高，尤其是叶酸杂质C和叶酸杂质E与叶酸主成分无法基线分离的问题，甚至在最终检测结果中，部分杂质并未出峰，无法进行含量测定。综上所述，可以看出由于现有技术中的叶酸检测方法专属性不高，导致叶酸产品很难进行杂质定量监测分析。

检测方法

称取叶酸原料药适量置于容量瓶中，精密称定，加适量28.6g/L碳酸钠溶液是样品 完全溶解，分别加入叶酸杂质A、叶酸杂质B、叶酸杂质C、叶酸杂质D、叶酸杂质E、叶酸杂质G及叶酸杂质H各杂质对照品，再用流动相定量稀释至主成分浓度约1mg/ml，各杂质浓度约5μg/ml的混合溶液；取上述主成分及各杂质对照品混合溶液5μl进样分析，检测结果如下图所示。

进样分析色谱条件如下所示：色谱柱：chromcore120 C8 5um 4.6*250mm；流动相：甲醇‑0.1mol/L乙酸铵溶液(采用醋酸溶液调节至pH6.5)，甲醇‑0.1mol/L乙酸铵溶液的比例为12:88；检测波长：280nm；柱温：25℃；流速：0.4ml/min。从附图中可以看出，采用本实施例检测方法进行分析，叶酸主成分与叶酸杂质C的分离度为2.3，叶酸主成分与叶酸杂质E分离度为2.2，叶酸杂质C和叶酸杂质E于叶酸主成分间分离度良好，同时其他各组分分离度均大于1.5，相邻峰之间分离度高，该检测分析方法专属性高。

参考文献

[1]江苏开元药业有限公司. 一种叶酸及其八种杂质的检测方法:CN202110252623.8[P]. 2022-09-13.