FITC标记山羊抗小鼠IgG(H+L)

背景^[1-7]

FITC标记山羊抗小鼠IgG(H+L)用纯化的小鼠IgG免疫山羊，然后用亲和纯化柱对获得的抗血清进行纯化，并经过人IgG吸附纯化的优质二抗。对人IgG几乎没有结合能力。

FITC（异硫氰酸荧光素）荧光标记的抗小鼠二抗与小鼠IgG分子有特异性反应，与其它小鼠免疫球蛋白的轻链有交叉反应。该二抗与血清内非免疫球蛋白无交叉反应，但可能与其它种属的免疫球蛋白有交叉反应。FITC标记山羊抗小鼠IgG(H+L)用于免疫荧光染色时的推荐稀释比例为1:500。实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节荧光标记二抗的稀释比例，推荐的调节范围为1:200-1000。

FITC（Fluorescein Isothiocyanate，异硫氰酸荧光素）纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。FITC分子量为389。4，吸收光波长为490～495nm，发射光波长为520～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。FITC在冷暗干燥处可保存多年，是目前应用最广泛的荧光素。

由于FITC是小分子化合物，每一个抗体可标记几个FITC分子，IgM通常用小分子的荧光素标记，如FITC、Cy3/5、Texas Red等。然而FITC的缺点是淬灭快，因此要和抗淬灭剂一起使用。FITC性质稳定，能与蛋白质结合，是检测组织细胞内蛋白质最常用的荧光探针。它还能标记抗体，可用于免疫组织化学单染或多重染色。FITC荧光二抗主要优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标本中的绿色荧光少于红色。缺点是在光照下易淬灭，易受自发荧光影响。

应用^[8][9]

FITC标记山羊抗小鼠IgG(H+L)可用于检测小鼠IgG亚型种类及含量变化免疫组化实验：

通过对已获得的嵌入型蛋白SLP-Multi VP1的氨基酸序列,应用在线软件Swiss-Model和Swiss-Pbd Viewer软件成功对该蛋白三维结构进行预测,并标注了三型FMDV不同表位的位置。

用已获得的嵌入型蛋白SLP-Multi VP1与重组蛋白SLP免疫6周龄的昆明小鼠,以PBS作为阴性对照组。小鼠经三次免疫后,摘取其脾脏组织分离总淋巴细胞,按既定方法处理并通过流式细胞仪分析各免疫组小鼠CD4+T和CD8+T细胞的变化,试验结果显示:嵌入型蛋白SLP-Multi VP1免疫组的CD4+T与CD8+T数量高于SLP免疫组及PBS对照组,差异显著(P<0.05)。该结果提示嵌入型蛋白SLP-Multi VP1可诱导机体产生免疫反应。

将嵌入型蛋白SLP-Multi VP1与重组蛋白SLP免疫6周龄的BALB/c小鼠和昆明小鼠,用间接ELISA方法检测了三次免疫后各组小鼠的总Ig G水平,试验结果显示,2种小鼠均能产生较高滴度的Ig G(P<0.05),该结果表明嵌入型蛋白SLP-Multi VP1具有良好的抗原性,并且2种小鼠的Ig G水平差异不显著(P>0.05),表明不同种小鼠间无差异性。

经第三次免疫后,采集BALB/c和昆明小鼠的血清,采用Ig G亚型ELISA试剂盒(e Bioscience公司)进行检测Ig G1和Ig G2a水平,获得的实验数据通过SPSS统计学分析,试验结果显示:在两种免疫动物小鼠模型中,嵌入型蛋白SLP-Multi VP1组Ig G1和Ig G2a水平均高于SLP免疫组,差异显著(P<0.05)。另外,在嵌入型蛋白SLP-Multi VP1免疫组中,Ig G2a的水平高于Ig G1,差异显著(P<0.05)。而在SLP免疫组中,Ig G1和Ig G2a水平差异不显著(P>0.05),该结果提示嵌入型蛋白SLP-Multi VP1可能倾向于激发Th1类免疫应答。本试验对各型FMDV VP1基因表位嵌入型蛋白SLP-Multi VP1免疫特性更深入的研究奠定了基础。

参考文献

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