孔雀石绿溶液的配制与使用方法

抗酸染色法acid－fast staining method 1882年由埃利希(F.Ehrlich)首创并经F.Ehrlich)齐尔(Ziehl)改进而创造出的细菌染色法。其中最具代表性的为对结核菌的齐尔-尼尔森(Ziehl－Neelsen)染色法和齐尔-加贝特(Ziehl－Gabbet)染色法。

齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。

抗酸菌细胞壁富含蜡与脂质导致染色效率低，过去需要加热石炭酸溶液加速细胞壁形成复合物，现代采用特殊工艺配制，不需要进行加热即可完成染色。抗酸菌细胞壁被品红染料染色后几乎不可能被脱色，即使使用盐酸化乙醇脱色液也无法脱色。利用抗酸菌的这个特点，可以在显微镜下与非抗酸菌进行区分。

孔雀石绿溶液可用作生物染色剂，也用作丝绸、皮革和纸张的染料。商品孔雀石绿染料，是将色素溶于热草酸溶液冷却后得草酸盐的结晶，2C23H24N2.C2H2O4。或用盐酸中和后，加定量的氯化锌ZnCl2结晶出氯化锌复盐3C23H25N2CL.2ZnCl2，成为绿色碱性染料，把细菌或细胞组织染成蓝绿色，方便在显微镜下研究。

目前国内市场没有抗酸染色液复染用孔雀石绿复染，经染色对比用孔雀石绿溶液复染后抗酸染色阴性菌呈蓝绿色，背景更清晰，优势明显。

配制方法

一种孔雀石绿溶液的配制方法，其特征在于：所述孔雀石绿溶液的配制方法具体实施步骤如下：

A、称取孔雀石绿(草酸盐)6g溶于100ml 95％乙醇中；

B、加入纯化水850ml搅拌均匀；

C、用普通滤纸过滤；

D、加入甘油50ml搅拌均匀灌装黑色或棕色瓶中备用。

使用方法

一种孔雀石绿溶液的使用方法，其特征在于：所述孔雀石绿溶液抗酸染色方法步骤如下：

A、固定后的涂片放置于玻片架上；

B、加石炭酸品红溶液染色，试剂完全覆盖样本并停留5分钟，流动自来水冲洗直到没有云雾状染剂出现，沥去标本上剩余的水；

C、加盐酸乙醇溶液脱色，试剂完全覆盖样本并停留15～30秒(视标本厚度决定)，流动自来水立即冲洗，沥去标本上剩余的水；

D、加孔雀石绿溶液染色，试剂完全覆盖样本并停留1分钟，流动自来水立即冲洗，沥去标本上剩余的水；

E、以滤纸吸干或在空气中风干，或50℃烘干后镜检；

抗酸染色结果如下：

经染色对比用孔雀石绿溶液复染后抗酸染色阴性菌呈蓝绿色，背景更清晰，优势明显。

参考文献

CN108593396A