实验室常见的核酸电泳缓冲液:TBE、TAE和MOPS缓冲液
发布日期:2024/10/12 14:22:45
核酸电泳缓冲液的作用与分类
核酸电泳是分子生物学研究中的一项基本技术,用于分离和分析DNA或RNA分子。TBE、TAE和MOPS缓冲液是核酸电泳中最常用的缓冲系统,它们各自具有独特的特性和应用场景。
TBE缓冲液:由Tris、硼酸和EDTA组成,具有较高的缓冲能力,适合于小分子DNA片段的分离。TBE的高缓冲能力有助于维持电泳过程中pH值的稳定,从而提高分辨率。
TAE缓冲液:与TBE相比,TAE的缓冲能力较弱,但其配制更为简便,成本较低。TAE适合于大分子DNA片段的电泳分析,以及需要进行后续酶促反应的实验。
MOPS缓冲液:MOPS是一种有机磺酸类化合物,具有良好的水溶性和稳定性。MOPS缓冲液在RNA电泳中的应用尤为重要,因为它能有效防止RNA的降解和变性,提高RNA分子的分离效果。
配制方法
TAE缓冲液
MOPS缓冲液
实验中经常将TAE配制成10× 或者 50× 的储液,实验前稀释储液到1×的工作液。
1x TAE 缓冲液的成分是:
40 mM Tris (pH 7.6)
20 mM acetic acid
1 mM EDTA
50x TAE储液配制方法:
将Tris(FW=121) 242g,100 ml 0.5 M EDTA, 57.1 ml的冰醋酸溶解在600 ml的去离子水中;而后调节pH至8.3,加去离子水定容至1L后,室温保存。使用时稀释50倍 即为1×TAE Buffer。
TBE缓冲液
TBE缓冲液可以配置成 5× 或者 10×的储液。
1x TBE 缓冲液的成分是:
89 mM Tris (pH 7.6)
89 mM boric acid
2 mM EDTA
10x TBE 储液配制方法:
将Tris(FW=121)108g,硼酸(FW=61.8)55g,40 ml 0.5 M EDTA 溶解在600 ml的去离子水中;而后调节pH至8.3,加去离子水定容至1L后,室温保存。使用时稀释10倍 即为1×TBE Buffer。
MOPS缓冲液
10× MOPS缓冲液的成分是:
200 mM MOPS
20 mM NaOAc
10 mM EDTA
41.8 g MOPS溶于DEP℃水;
10× MOPS缓冲液储液配制方法:
用2 N NaOH调节至pH7.0,量取20mL1 M NaOAc(DEPC处理),20 mL 0.5 M EDTA(pH8.0)(DEPC处理);加DEPC水定容至1L,0.45μm滤膜除杂,室温避光保存。
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