噻唑蓝的性质及其显色应用

性质

噻唑蓝又称噻唑兰，英文名：Thiazolyl Blue，CAS号：298-93-1，分子量：414.322，分子式：C18H16BrN5S，熔点：195°C(dec.)(lit.)，为黄色或橙黄色粉末。微溶于甲醇中，但难溶于水或乙醇中。用醚、丙酮或乙酸乙酯也不能将其完全溶解，易溶于DMSO中。

原理机制

1983年，Mosman首次报道了用噻唑蓝染色法来测定细胞的生长和存活。噻唑蓝是一种唑氮盐，活细胞特别是增殖细胞通过线粒体脱氢酶(如琥珀酸脱氢酶和心肌黄酶)将黄色的噻唑蓝还原成蓝紫色的甲臢(Fomzan)[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-5-(3-羧甲酯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑]，甲臢颗粒越多，蓝紫色越深，用有机溶剂把颗粒溶解后，测定其光密度值，从而推测细胞浓度。死细胞或红细胞无此能力。甲臢产生的量与活细胞数成正比，活化的细胞比静止的细胞产生更多的甲臢。

应用

白丽等人采用噻唑蓝法测定免疫偶合物对肿瘤细胞的杀伤作用研究中，将被测试物与肿瘤细胞共同孵育2h后撤去测试物，加入新鲜培养液培养48h，然后加入噻唑蓝染液，4h后酶标仪测定。结果显示所测试的两种免疫偶合物对靶肿瘤有较强的细胞毒作用，这种作用明显强于对非靶细胞的作用。所测定的两种免疫偶合物具有临床应用价值^[1]。

柳喆等人在噻唑蓝显色法测定肝细胞再生因子的活性一文中，采用改良的简便、快速的噻唑蓝比色分析法测定肝细胞再生刺激因子的活性和特异性。选用的细胞株为肝源性细胞一人肝癌细胞HTC7721和非肝源性细胞一人肺癌细胞A549，结果显示肝细胞再生刺激因子对HTC7721细胞有增殖作用，而对人肺癌A549细胞不产生增殖现象^[2]。

何国群等人在研究噻唑蓝比色法在检测和评价化学物皮肤接触致敏性中的应用中，将致敏物质肉桂醛、DNCB和化妆品纤体精华液、防晒型营养水分别对BALB/c小鼠双耳进行连续3d染毒，第5天取小鼠耳部淋巴结制备单细胞悬液，用噻唑蓝比色法检测淋巴细胞增殖，用方差分析进行比较。同时采用传统实验方法-局部封闭涂皮法对DNCB、纤体精华液与防晒型营养水进行皮肤变态反应试验。结果显示与溶剂对照组比较，肉桂醛与DNCB能引起淋巴细胞的显著增殖，与空白对照组比较，纤体精华液与防晒型营养水未引起淋巴细胞明显增殖，经传统实验方法检测证实，DNCB引起75%动物皮肤变态反应，而纤体精华液与防晒型营养水未引起动物皮肤变态反应^[3]。

参考文献

[1]白丽,王晶,王涛. 噻唑蓝法测定免疫偶合物对肿瘤细胞的杀伤作用[J]. 大理学院学报（医学版）,2002,11(2):1-2,11. 

[2]柳喆,余环,陈章林,等.噻唑蓝显色法测定肝细胞再生因子的活性[J].江西医药,1995,(06):321-322.

[3]何国群,黄琼,黄俊明,等. 噻唑蓝比色法测定化学物皮肤致敏性的研究[J]. 中国卫生检验杂志,2006,16(8):1007-1008. DOI:10.3969/j.issn.1004-8685.2006.08.057.