绵羊血清的应用

背景^[1-6]

绵羊血清是经无菌采集、批量混合，最终过3次0．1um过滤分装而成。促细胞生长繁殖的三大指标超过国家标准。绵羊血清适合于单抗研制、较常规的原代和传代细胞培养、规模化培养的疫苗生产。

正常血清是用来描述来自没有用特异抗原进行免疫产生抗体的动物的血清。因此，正常血清与抗血清相对。正常血清包含血清蛋白的一般补体，包括存在于特定物种健康动物体内的不同种类的免疫球蛋白。提供的正常血清产品经过脂类抽提以提高透明度，经去盐和透析处理以去除包含叠氮化钠的磷酸缓冲液，并最后冻干以获得冻干粉末。正常血清非常适用于作为封闭试剂去除非特异性杂交。正常血清在检测一般或特异抗体纯化方法的时候也经常作为对照使用。

绵羊血清（无菌过滤）功能:

1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。

2.提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。

3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。

4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

5.起酸碱度缓冲液作用。

6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

绵羊血清价格鉴别方式:

血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。凝血块收缩，其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆的区别。

而在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。

应用^[7][8]

绵羊血清可用于普通细胞培养和配置试剂，也适用于正常封闭。

在绵羊肺炎支原体EF-Tu和HSP70蛋白免疫原性分析及补体ELISA方法的建立实验中选取绵羊肺炎支原体细菌延伸因子Tu(elongation factor Tu,EF-Tu)蛋白和热休克70蛋白(heat shock protein 70,HSP70),对其进行免疫原性分析,并建立了绵羊肺炎支原体血清抗体ELISA检测方法,以期为绵羊肺炎支原体病的防治提供一些研究基础。本文首先对绵羊肺炎支原体临床分离株Mo-1的elongation factor Tu,EF-Tu)EF-Tu和HSP70蛋白进行了表达和纯化。然后,通过免疫印迹试验证明EF-Tu和HSP70两种蛋白均存在于由绵羊肺炎支原体膜蛋白的TritonX-114提取物中。将原核表达的重组蛋白rEF-Tu(recombinant EF-Tu)和rHSP70(recombinant HSP70)分别免疫BALB/c小鼠,进行免疫原性分析。

结果表明,与绵羊肺炎支原体全细胞提取物(Mo extracts)免疫对照组比较,上述两种重组蛋白均能刺激小鼠产生较高的IgG水平,且IgG1和IgG2a水平显著高于Mo extracts对照组。rEF-Tu和rHSP70免疫组小鼠血清中Thl型(IFN-γ、TNF-α、IL-12p70)和Th2型(IL-4、IL-5、IL-6)细胞因子水平显著高于Mo extracts对照组。ELISPOT试验进一步证实,rHSP70比rEF-Tu和Mo extracts能诱导更多的特异性分泌IFN-γ的淋巴细胞。由此说明,rEF-Tu和rHSP70蛋白可使小鼠同时产生较强体液免疫应答及细胞免疫应答。

另外,体外生长抑制试验表明,抗rHSP70、抗rEF-Tu和抗Moextracts小鼠血清均可有效抑制固体培养基上绵羊肺炎支原体的生长,其中rHSP70组抑菌效果优于rEF-Tu组和Mo extracts组。本文利用菊糖提纯豚鼠血清中的补体C3b成分,免疫小鼠后筛选得到可用于建立补体结合酶联免疫吸附试验方法(complement fixation ELISA,CF-ELISA)的抗豚鼠补体C3b单克隆抗体。经鉴定,所获得的单克隆抗体具有高的亲和力及特异性,可特异识别豚鼠补体C3bα’链。在此基础上,选择免疫原性较优且具有高度保守性的rHSP70作为包被抗原,建立了Mo-rHSP70-CF-ELISA和Mo-rHSP70-iELISA方法,两者均具有良好的敏感性和特异性。

参考文献

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