人高密度脂蛋白(HDL)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

人高密度脂蛋白(HDL)Elisa试剂盒是一种用于定量测定人血清、血浆或其他相关生物液体样本中高密度脂蛋白(HDL)含量的实验工具。人高密度脂蛋白(HDL)ELISA试剂盒广泛应用于生命科学、医学等领域的研究中，用于评估个体的血脂水平、监测心血管疾病的风险等。高密度脂蛋白(HDL)是一种被认为具有保护作用的脂蛋白，能够将胆固醇从外周组织转运回肝脏进行代谢和排泄，从而降低动脉粥样硬化的风险。因此，通过检测HDL的含量，可以为临床诊断和治疗提供重要的参考依据。

人高密度脂蛋白(HDL)Elisa试剂盒

一、基本信息

产品名称：人高密度脂蛋白(HDL)ELISA试剂盒

检测原理：采用双抗体夹心ELISA酶联免疫法，通过抗原抗体反应和酶促显色反应来定量检测样本中的HDL含量。

样本类型：适用于人血清、血浆、尿液、唾液、细胞培养上清液、组织匀浆等多种样本类型。

用途：仅供科研实验使用，不得用于临床诊断。

二、产品规格与价格

人高密度脂蛋白(HDL)ELISA试剂盒的规格通常有48T和96T两种，价格因品牌、供应商及市场波动而有所不同。一般来说，价格范围可能在几百元至数千元之间。具体价格请参考各供应商的实际报价。

三、操作步骤

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用实例^[4][5]

人高密度脂蛋白(HDL)Elisa试剂盒可以用于载脂蛋白M对炎症因子表达的影响及其与冠心病的易感性

apo M+HDL的分离纯化及其与SR-BI结合能力检测目的:分离HDL组分中apo M+HDL和apo M-HDL颗粒,检测apo M+HDL和apo M-HDL颗粒在体外与SR-BI的结合能力。

方法:小鼠抗人apo M单克隆抗体通过共价结合方式不可逆的与Hi TrapNHS-activated HP 1 ml预装柱结合,通过亲和层析的方法,将HDL蛋白中apo M+HDL和apo M-HDL两个组分分离,进而采用BCA蛋白定量方法对分离的蛋白进行定量分析。选取人单核细胞株THP-1细胞经体外PMA、ox-LDL诱导,再经apo M–HDL、apo M+HDL、重组人apo M蛋白于37℃培养箱中分别孵育6 h,收集细胞并提取总蛋白,用抗SR-BI的单克隆抗体沉淀蛋白复合物后进行Western blot检测。通过免疫共沉淀方法检测apo M+HDL、apo M-HDL和重组apo M蛋白在THP-1细胞表面与SR-BI的相互作用。使用人高密度脂蛋白(HDL)Elisa试剂盒检测apo M+HDL、apo M-HDL的含量。

人高密度脂蛋白(HDL)Elisa试剂盒结果:人高密度脂蛋白HDL经Hi Trap NHS-activated HP柱子纯化,分别收集流出液(apo M–HDL)、洗脱液(apo M+HDL),apo M抗体进行Dot blot及western检测,结果显示,在未经纯化的HDL蛋白、纯化后第一、二、三管洗脱液中均能检测到apo M蛋白,流出液(apo M–HDL)组分中未检测到apo M蛋白。apo M–HDL、apo M+HDL蛋白经透析后定量,终浓度分别为3.23 mg/ml和0.34 mg/ml,总体积为6.2ml和3.5ml。PMA处理THP-1细胞,其表面SR-BI的表达会有升高约10%左右,免疫共沉淀结果显示,apo M–HDL、apo M+HDL孵育组的总蛋白经SR-BI抗体沉淀复合物中均能检测到SR-BI和HDL蛋白,重组人apo M孵育组的总蛋白经SR-BI抗体沉淀复合物中也能检测到SR-BI和apo M蛋白。结论:经HDL蛋白成功分离apo M–HDL和apo M+HDL两种蛋白成分。证实THP-1细胞表面apo M–HDL、apo M+HDL和重组人apo M与SR-BI蛋白之间存在相互作用。

参考文献

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[4]Induction of insulin secretion by apolipoprotein M,a carrier for sphingosine 1-phosphate[J].Makoto Kurano;;Masumi Hara;;Koichi Tsuneyama;;Hideyuki Sakoda;;Tomo Shimizu;;Kazuhisa Tsukamoto;;Hitoshi Ikeda;;Yutaka Yatomi.BBA-Molecular and Cell Biology of Lipids,2014

[5]郑璐.载脂蛋白M对炎症因子表达的影响及其与冠心病的易感性[D].苏州大学,2015.