人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)ELISA KIT是一种用于科研实验的试剂盒，主要用于检测人及相关生物样本中TRANCE的含量。TRANCE，也被称为破骨细胞分化因子（ODF）、受体激活的核因子B（NF-B）配体（RANK-L）和破骨细胞生成阻遏因子配体（OPG-L），是肿瘤坏死因子家族的一个新成员。它表达的蛋白在免疫系统和骨的发生及保持平衡中起着重要的调节作用。

人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)ELISA KIT

一、基本信息

产品名称：人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子（TRANCE）ELISA KIT

英文名称：Human TNF related activation induced cytokine,TRANCE ELISA Kit

用途：仅用于科研实验，不得用于临床诊断

样本类型：血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液等

规格：常见规格有96T和48T，不同品牌和供应商的具体规格可能有所不同

保存条件：一般需要在2-8℃下保存，具体以产品说明书为准

二、产品特点

灵敏度高：能够检测到样本中微量的TRANCE

特异性强：能够特异性地识别并结合TRANCE，减少非特异性反应

操作简便：实验步骤相对简单，易于操作

结果准确：通过酶联免疫吸附法（ELISA）进行检测，结果可靠

三、检测方法

ELISA检测的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

四、注意事项

样本处理：样本收集后应尽快处理，避免反复冻融。不同类型的样本处理方法可能有所不同，具体以产品说明书为准。

试剂准备：试剂在使用前需达到室温，并按照说明书进行稀释和准备。

操作规范：在操作过程中应严格遵守实验规程，避免交叉污染和误操作。

结果分析：结果分析时应以酶标仪读数为准，避免主观判断。

应用^[4][5]

人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)ELISA KIT可以用于葛根素通过Wnt4/β-catenin信号通路抑制绝经后骨质疏松的机制研究

研究:(1)背部双侧卵巢摘除法建立骨质疏松小鼠模型,葛根素干预骨质疏松小鼠模型,观察其对于骨质疏松小鼠的改善作用,探讨Wnt/β-catenin信号通路在骨质疏松小鼠中的作用机制;(2)将小鼠骨髓单核巨噬细胞诱导培养形成破骨细胞,葛根素干预,探讨葛根素对破骨细胞中Wnt4/β-catenin信号通路的调节作用。通过动物和细胞实验,揭示葛根素通过Wnt4/β-catenin信号通路抑制骨质疏松的分子机制,以期为葛根素临床应用提供理论依据。

方法:(1)将10只无特定病原体(SPF)级雌性C57BL/6小鼠随机分为两组,一组为去卵巢组(OVX),一组为假手术组(Sham),通过血清生物化学法检测血清中钙(Ca)、磷(P)、镁(Mg)、碱性磷酸酶(ALP)的含量、Micro CT扫描三维重建、病理组织HE染色、TRAP/ALP染色、免疫荧光染色检测TRAP蛋白的表达量。(2)将18只无特定病原体(SPF)级雌性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham-NS)、去卵巢生理盐水组(OVX-NS)、去卵巢葛根素组(OVX-Pu),每组6只。采用背部双侧卵巢摘除法建立C57BL/6小鼠骨质疏松模型,模型鉴定成功后,Sham-NS组不摘除卵巢,腹腔注射生理盐水;OVX-NS组去除双侧卵巢,腹腔注射生理盐水;OVX-Pu组摘除卵巢后通过腹腔注射2.5mg/100μL/只葛根素溶液,连续给药12周/d,每天观察小鼠的行为学变化;血清生物化学检测方法检测钙磷镁、碱性磷酸酶、骨代谢三项甲状旁腺激素(PTH)、降钙素(CT)、骨钙素(BGP)等生化指标的变化水平;病理组织化学染色和影像学检测小鼠股骨组织的病理改变情况;Real time PCR、人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)ELISA KIT检测用药干预前后骨组织中Wnt4、β-catenin、C-myc、Cyclin D1、s FRP2、TCF1等相关指标m RNA的相对表达水平;免疫组织化学染色测定股骨组织中Wnt4、β-catenin、Cyclin D1、HNF以及s FRP2蛋白含量的表达;(3)小鼠骨髓单核巨噬细胞进行提取诱导培养形成破骨细胞,经葛根素干预后,通过TRAP(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色观察破骨细胞的形成以及增殖活性,免疫荧光技术测定TRAP以及Wnt4蛋白的表达。

人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)ELISA KIT结果:(1)经背部双侧卵巢摘除法术后8周可以建立小鼠骨质疏松模型。(2)OVX-Pu组及Sham-NS组的小鼠活动正常、饮食良好、毛发光泽发亮,OVX-NS组的小鼠容易脱毛,毛发色泽暗淡,活动减弱、反射延长、排泄增多,饮食饮水少。(3)血清生物化学检测发现OVX-Pu组,ALP的含量较OVX-NS组增多,差异具有统计学意义;钙、磷、镁、骨代谢三项改变均好转,但是变化差异不显著。(4)影像学显微断层扫描仪(Micro CT)扫描股骨组织发现卵巢摘除后骨小梁数目、厚度,骨板厚度均减少,葛根素干预后呈现好转趋势。(5)股骨组织病理组织切片染色显示葛根素干预后,骨小梁数目增加,结构完整,髓腔内脂肪空泡减少,髓腔变小,血管增生明显。(6)Real time PCR结果显示葛根素干预12周后,OVX-Pu组骨组织中Wnt4、β-catenin、TCF1、Cyclin D1、C-myc mRNA相对表达量均比OVX-NS组的高,OVX-NS组s FRP2的表达量比OVX-Pu组的更多,差异具有统计学意义。(7)人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)ELISA KIT、免疫组织化学法测定葛根素干预后,sFRP2的阳性颗粒减少,Wnt4、β-catenin、Cyclin D1、HNF阳性颗粒表达增多,但是各蛋白的平均积分光密度值差异不明显。(8)骨髓单核巨噬细胞通过诱导因子巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)、核因子κB受体活化因子配体(Recombinant Mouse TRANCE/RANK L/TNFSF11,RANKL)诱导培养形成破骨细胞。葛根素干预后进行TRAP染色以及免疫荧光技术检测发现,50μg/ml葛根素浓度组TRAP的表达降低明显,Wnt4的表达则增加(与M-CSF+RANKL组相比),差异具有统计学意义。

参考文献

[1]WNT Signaling and Bone:Lessons From Skeletal Dysplasias and Disorders.[J].Huybrechts Yentl;;Mortier Geert;;Boudin Eveline;;Van Hul Wim.Frontiers in endocrinology,2020

[2]Bisphosphonate-Induced Osteonecrosis of the Jaws(BIONJ).[J].Singh Madhumati;;Gonegandla Giriraj Sandeep.Journal of maxillofacial and oral surgery,2020

[3]Pharmacological Therapy of Osteoporosis:What's New?[J].Iolascon Giovanni;;Moretti Antimo;;Toro Giuseppe;;Gimigliano Francesca;;Liguori Sara;;Paoletta Marco.Clinical interventions in aging,2020

[4]Integrin-associated molecules and signalling cross talking in osteoclast cytoskeleton regulation.[J].Kong Lingbo;;Wang Biao;;Yang Xiaobin;;He Baorong;;Hao Dingjun;;Yan Liang.Journal of cellular and molecular medicine,2020

[5]李兰.葛根素通过Wnt4/β-catenin信号通路抑制绝经后骨质疏松的机制研究[D].右江民族医学院,2021.