人转甲状腺素蛋白(TTR)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

人转甲状腺素蛋白(TTR)Elisa试剂盒是用于检测人转甲状腺素蛋白（Transthyretin，简称TTR）浓度的实验工具，广泛应用于科学研究领域。

人转甲状腺素蛋白(TTR)Elisa试剂盒产品特点

高灵敏度：能够检测极低浓度的TTR，具体检测限因产品而异，如赛培森生物的产品检测限为0.01pg/mL。

高特异性：能够特异性地识别并结合TTR，减少非特异性干扰。

易于操作：采用酶联免疫法（ELISA），操作步骤相对简单，适合科研实验室使用。

人转甲状腺素蛋白(TTR)Elisa试剂盒应用范围

适应物种：不仅限于人类，还可用于大鼠、小鼠、猴、鸡、羊等多种物种的TTR检测。

样本类型：包括血清、血浆、组织标本及相关液体等。

人转甲状腺素蛋白(TTR)Elisa试剂盒

人转甲状腺素蛋白(TTR)Elisa试剂盒操作步骤

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

人转甲状腺素蛋白(TTR)Elisa试剂盒可以用于毛细管电泳与MALDI-TOF/MS法联用测定血清转甲状腺素蛋白的化学修饰

人转甲状腺素蛋白(TTR)与家族性淀粉样多发神经病和老年性淀粉样变相关,TTR主要是由肝脏和脉络丛细胞产生,参与转运甲状腺素和视黄醇蛋白。当TTR立体结构发生改变,可以聚合形成纤维状结构沉积于细胞间质,可以导致家族性淀粉样多发神经病和老年性淀粉样变。老年性淀粉样变病变部位沉积的淀粉样变纤维主要是未突变的TTR,家族性淀粉样多发神经病是基因点突变的TTR。关于老年性淀粉样变的形成机制仍不完全明确,但是体外试验表明人转甲状腺素蛋白立体结构改变是淀粉样变纤维形成的重要步骤。本研究的目的是建立一种毛细管电泳与基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱联用测定血清TTR化学修饰的方法。

首先采用人转甲状腺素蛋白(TTR)Elisa试剂盒酶联免疫吸附测定试剂盒测定20例老年性淀粉样变患者及20例健康体检者血清TTR含量,健康对照组血清TTR含量为0.25±0.04g/L,老年性淀粉样变组血清TTR含量为0.26±0.03g/L,两组间TTR差异无统计学意义(P>0.05)。应用毛细管电泳法分离血清转甲状腺素蛋白,利用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱测定血清TTR的化学修饰。

人转甲状腺素蛋白(TTR)Elisa试剂盒分析结果显示健康对照组和老年性淀粉样变组血清TTR均发现4种主要类型的TTR修饰峰,两组间TTR的修饰峰存在差异,与标准对照计算相对分子质量[质/荷比(m/z)]分别为：13750.86±1.48、13830.63±2.76、13871.70±2.70、13919±14.77,经过与氨基酸相对分子质量比较分别对应：未修饰转甲状腺素蛋白、磺化转甲状腺素蛋白、半胱氨酸转甲状腺素蛋白和半胱氨酸甘氨酸转甲状腺素蛋白。由于蛋白组学技术分析发现TTR化学修饰能够影响立体结构,促进淀粉样变纤维的形成。一些未知因素触发淀粉样变纤维的形成,体内微环境例如蛋白质的含量、离子强度、pH值、特殊的酶和其它细胞成分可能是关键。提示机体代谢对于TTR蛋白的影响可能与淀粉样变纤维形成密切相关。在老年性淀粉样变患者老龄或氧化应激造成的TTR化学修饰可能是淀粉样变沉积组织的一个潜在危险因素。

本研究使用了人转甲状腺素蛋白(TTR)Elisa试剂盒酶联免疫吸附法、毛细管电泳法和基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱三种方法,建立测定血清转甲状腺素蛋白化学修饰的方法。使用酶联免疫吸附法初步检测转甲状腺素蛋白含量,毛细管电泳作为一项较新的分离技术,以其高通量、高灵敏度、快捷低耗的优势弥补了传统双向凝胶电泳的不足。利用毛细管电泳法分离效果好的优势和基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱能分析结构信息的特点使分析方法同时具有高分离效率与高灵敏度,为今后进一步探索淀粉样变性的发病机制提供了一种检测方法。

参考文献

[1]Chain reaction of amyloid fibril formation with induction of basement membrane in familial amyloidotic polyneuropathy.[J].Misumi Yohei;;Ando Yukio;;Ueda Mitsuharu;;Obayashi Konen;;Jono Hirofumi;;Su Yu;;Yamashita Taro;;Uchino Makoto.The Journal of pathology,2009

[2]Direct UV detection of underivatized amino acids using capillary electrophoresis with online sweeping enrichment.[J].Jiang Xuemei;;Xia Zhining;;Wei Weili;;Gou Qian.Journal of separation science,2009

[3]SELDI-TOF Mass Spectrometry Evaluation of Variant Transthyretins for Diagnosis and Pathogenesis of Familial Amyloidotic Polyneuropathy[J].Ueda,Mitsuharu;Misumi,Yohei;Mizuguchi,Mineyuki;Nakamura,Masaaki;Yamashita,Taro;Sekijima,Yoshiki;Ota,Kazutoshi;Shinriki,Satoru;Jono,Hirofumi;Ikeda,Shu-ichi;Suhr,Ole B;Ando,Yukio.Clinical Chemistry,2009(6)

[4]Enhanced amine and amino acid analysis using Pacific Blue and the Mars Organic Analyzer microchip capillary electrophoresis system.[J].Chiesl Thomas N;;Chu Wai K;;Stockton Amanda M;;Amashukeli Xenia;;Grunthaner Frank;;Mathies Richard A.Analytical chemistry,2009

[5]张文亮.毛细管电泳与MALDI-TOF/MS法联用测定血清转甲状腺素蛋白的化学修饰[D].天津医科大学,2012.