大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)Elisa试剂盒是一种用于体外定量检测大鼠样本中促甲状腺素释放激素（TRH）浓度的实验试剂盒。这些试剂盒主要用于科研目的，不适用于临床诊断。以下是关于大鼠促甲状腺素释放激素（TRH）ELISA试剂盒的一些详细信息：

大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)Elisa试剂盒检测原理：试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。具体来说，使用抗大鼠TRH抗体包被于酶标板上，样品中的大鼠TRH会与包被抗体结合。接着依次加入生物素化的抗大鼠TRH抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，形成免疫复合物。加入显色底物TMB后，在辣根过氧化物酶的催化下，TMB呈现蓝色，加终止液后变成黄色。最后，在450 nm波长处测量吸光度（OD值），通过绘制标准曲线计算出样品中大鼠TRH的浓度。

大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)Elisa试剂盒基本性能：

灵敏度：灵敏度为0.94 ng/mL。

检测范围：检测范围为1.56-100 ng/mL。

特异性：可检测样本中的大鼠TRH，且与其他类似物无明显交叉反应。

大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)Elisa试剂盒组成：试剂盒通常包含预包被酶标板、标准品、稀释液、HRP标记抗体、显色底物、终止液等。

保存条件：试剂盒应在2-8°C保存，有效期标注于标签上（通常是6个月）。

样本类型：适用于血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清等生物液体。

大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)Elisa试剂盒

使用大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)Elisa试剂盒进行实验时，需要按照以下步骤进行：

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)Elisa试剂盒可以用于EGF、TRH及地塞米松影响未成熟胎肺发育及妊娠结局的比较研究

为了进一步研究EGF、TRH及GC对胎肺发育的作用机制及其对母-胎安全性的影响，本课题通过兔的动物模型比较了EGF、TRH及Dex对胎肺形态发育、功能成熟及妊娠结局的影响，主要结果如下：一．比较EGF、TRH与地塞米松对未成熟胎肺形态发育的作用为了进一步了解EGF、TRH与地塞米松对胎肺形态发育的促进作用是否存在差异及妊娠时间对治疗效果的影响情况，本研究利用兔的动物模型，比较了EGF、TRH与地塞米松在妊娠不同时间产前母体用药对胎肺形态发生及肺11型上皮细胞分化的影响。

大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)Elisa试剂盒结果发现：在妊娠27天，EGF、TRH及地塞米松治疗组比对照组肺泡腔更规则，肺泡间隔更薄。超微结构显示EGF、TRH及地塞米松治疗能明显增加胎肺11型上皮细胞的板层体数量，减少细胞浆内的糖原含量，三者的作用程度无明显不同。（2）在胎肺发育的较早期阶段（妊娠22～24天），EGF、TRH及地塞米松治疗仍可明显促进胎肺肺泡腔样结构形成，但地塞米松的作用程度强于另外两种激素。此时；除地塞米松治疗组个别细胞包含少量不成熟的板层体外，EGF、TRH，治疗组及对照组胎肺均无板层体出现。各治疗组及对照组胎肺细胞内其它；丸胞器发育也不明显。相反，糖原含量在各组均非常丰富。

二、EGF、TRH及地塞米松对胎肺SPmRNAs表达的调节目前的研究表明地塞米松在体内、体外对SPmRNAs的调节受多种因素影响。但EGF和TRH对表面活性物质蛋白mRNAs水平有何影响尚未阐明。因此本研究通过比较mH、EGF及地塞米松母体治疗对胎肺SP－A、SP－B、SPmRNA水平的影响，进一步阐明这些激素和生长因子对胎肺的作用机制。

大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)Elisa试剂盒结果发现：Dex、EGF及TRH在兔妊娠24～26天母体治疗可增加SP－BmRNA水平，但三种激素对SP－A和SP－C的mRNA水平无明显影响；妊娠27天胎肺SP－A、SP－B和SP－CmRNAs己达到或超过孕兔水平。（2）Dex在妊娠22～24天治疗可促进SP－BmRNA的表达，而EGF和TRH的作用不明显。（3）在妊娠27天，胎肺SP－BmRNA的表达明显低于SP－A和SpffiRNAS的表达。

参考文献

[1]Congenital alveolar proteinosis caused by a novel mutation of the surfactant protein B gene and misalignment of lung vessels in consanguineous kindred infants[J].M.Wallot;;C.Wagenvoort;;D.deMello;;K.-M.Müller;;J.Floros;;C.Roll.European Journal of Pediatrics,1999(6)

[2]Epidermal growth factor,vascular endothelial growth factor and progesterone promote placental development in rat whole-embryo culture[J].M.Jojović;;Friedrich Wolf;;Ulrich Mangold..1998

[3]Surfactant protein-A:New insights into an old protein-part I[J].Ashish R.Kumar;;Jeanne M.Snyder.The Indian Journal of Pediatrics,1998(5)

[4]Growth factor/cytokine secretion by a permanent human endometrial cell line with embryotrophic properties[J].Nina N.Desai;;James M.Goldfarb.Journal of Assisted Reproduction and Genetics,1996(7)

[5]王凤英.EGF、TRH及地塞米松影响未成熟胎肺发育及妊娠结局的比较研究[D].第三军医大学,2002.