对人胚胎绒毛膜细胞的相关研究

背景及概述^[1]

绒毛膜是哺乳动物胎膜之一，参与形成胎盘。是由胚外外胚层(或称滋养层、滋胚层)和胚外体壁中胚层共同组成的膜状结构。绒毛膜上因有大量绒毛而得名。动物种类不同，绒毛的大小、分布特点均不相同。有的呈分散分布(如马的)，有的呈密集簇状(如牛、羊的)。绒毛膜与子宫内膜相贴，以进行母体和胎儿间物质交换。禽类的浆膜在结构和功能上均与绒毛膜相似，虽无绒毛，但也是胎膜之一，故有人也把浆膜称之为绒毛膜。人胚胎绒毛膜细胞均来自新鲜组织，用于培养人胚胎绒毛膜细胞的的培养采用人胚胎绒毛膜细胞培养试剂盒。

相关研究^[2]

有研究构建HJURP基因的RNA干扰慢病毒表达载体并在人胚胎绒毛膜细胞上鉴定其沉默效率，进而提供HJURP基因缺陷表达的原代胚胎绒毛细胞模型。针对目的基因HJURP的序列，按照RNA干扰序列的设计原则，设计合成3个HJURP基因特异性的小分子干扰RNAi靶点，将其合成短发夹RNA(shRNA)并退火形成双链RNA，克隆至慢病毒载体中形成shRNA表达载体，通过PCR和测序鉴定获取正确重组载体。

将筛选出的重组载体与慢病毒包装质粒共转染293T细胞并测定病毒滴度。随后将其干扰人胚胎绒毛细胞，采用Westernblotting和real-TimePCR检测靶基因的沉默效率。结果对重组载体pHBLVU6-ZsGreen-Puro进行测序鉴定，证实插入的shRNA序列无碱基变异。重组慢病毒载体经293T细胞包装后，病毒滴度为108PFU/ml。RNA干扰人胚胎绒毛膜细胞HJURP基因后，可见感染后内源HJURP的蛋白表达水平显著下降，HJURPmRNA水平明显下降，其中shRNA1干扰效率大于70%。结论成功构建了HJURP基因的shRNA慢病毒表达载体，该重组载体可以在细胞水平有效沉默靶基因，为后续研究HJURP基因表达抑制对人胚胎绒毛膜细胞的增殖凋亡和染色体分离的影响，探索HJURP基因在自然流产发生中的作用机制提供细胞模型。

主要参考资料

[1] 兽医大辞典

[2] HJURP基因缺陷表达的人胚胎绒毛细胞模型的构建与鉴定a