3-(二乙氧基邻酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮的制备与检测方法

DEPBT(3-(二乙氧基邻酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮，3-(Diethoxyphosphoryloxy)-1,2,3-benzotriazin-4(3H)-one)，是一种含磷肽缩合试剂，具有反应条件温和，底物氨基酸侧链羟基、咪唑基等官能团不必保护，产物消旋率低等优点。DEPBT不仅可用于生物活性多肽(包括环肽)的合成，而且可以在一些重要天然产物全合成的关键步骤酰胺键的缩合反应中应用。

制备方法

首先，邻氨基苯甲酸在氯化亚砜作用下酯化，得到邻氨基苯甲酸甲酯；而后邻氨基苯甲酸甲酯与盐酸羟胺在碱性条件下作用得到羟肟酸衍生物，接着此衍生物与亚硝酸钠在酸性环境下反应得到3-羟基-1，2，3-苯并三嗪4(3H)-酮。三氯化磷与乙醇反应得到亚磷酸三乙酯，然后不经分离，直接以硫酰氯氧化，得到二乙氧基磷酰氯。最后，3-羟基-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮和二乙氧基磷酰氯在二氯甲烷中反应，生成酰胺键缩合试剂3-(二乙氧基邻酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮^[1]。

检测方法^[2]

1、溶液制备

对照品贮备溶液：取3-(二乙氧基邻酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮对照品约50mg， 精密称定，置10ml量瓶，加乙腈适量使溶解，加 乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。 对照品溶液：精密量取对照品贮备溶液1ml， 置10ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 供试品溶液：取3-(二乙氧基邻酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮供试品约12.5mg，精密称定，置25ml量瓶，加乙腈适量溶解，加乙腈稀释至刻度，摇匀。空白溶液：乙腈。

2、色谱条件

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（4.6 mm×25cm，5μm）； 柱温：30℃；进样体积：20μl；检测波长：265nm；样品室温度：5℃；流动相A：0.1%三氟醋酸水溶液，B：0.1%三氟醋酸乙腈溶液；流速：1.0ml/min。

参考文献

[1] 冉莉楠,邢国文,申秀民,等. 推荐一个综合化学教学实验——酰胺键缩合试剂DEPBT的合成[J]. 大学化学,2007,22(3):41-43,60. DOI:10.3969/j.issn.1000-8438.2007.03.011.

[2] 李云峰,魏振兴,郭静,等. HPLC梯度洗脱法测定DEPBT的纯度[J]. 食品与药品,2018,20(6):404-407. DOI:10.3969/j.issn.1672-979X.2018.06.002.