Fmoc-Pbf-精氨酸有关物质的检测方法

精氨酸是人体必需的氨基酸之一，是合成多肽的重要原料。由于精氨酸呈碱性及含有多个官能团，使得研究其性质及对多肽合成时不能直接使用，必须对其氨基和侧链胍基进行有效的保护，而pbf对酸最敏感，在TFA/H2O体系中常温就能方便的脱除，因此pbf是应用最为广泛的精氨酸保护基，因此，开发一种Fmoc-Pbf-精氨酸的检测方法具有重要的工业价值。

检测体系

醋酸酸性较三氟乙酸弱，且三氟乙酸一般禁用于质谱分析，因为三氟乙酸根信号很强，会掩盖几乎所有的负离子，甚至污染质量分析器。现有的方法是用三氟乙酸体系测Fmoc-Arg(pbf)-OH有关物质，TFA起到类似离子对的作用，一般浓度在0.05-0.1％，过高的浓度，会使溶液偏酸，长时间使用可能影响色谱柱寿命。研究人员用醋酸体系和三氟乙酸体系也做了对比，结论醋酸体系对检测Fmoc-Arg(pbf)-OH有关物质在分离度，以及保护色谱柱方面更有优势。

检测步骤

步骤一：将Fmoc-Arg(pbf)-OH和各杂质对照品Fmoc-Arg-OH，Fmoc-β-Ala-OH，Fmoc-β-Ala-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH分别溶于乙腈中，得到浓度分别为0.5mg/ml的样品溶液和杂质对照品溶液，以乙腈为空白溶液。

步骤二：吸取Fmoc-Arg(pbf)-OH溶液1ml，各杂质对照品溶液各1ml，形成混合溶液。

步骤三：采用ZORBAX ODS 4.6mmx250mm 5μ，设柱温35℃，波长220nm，进行梯度洗脱。

步骤四：进样顺序及进样量，先进步骤二的混合溶液10ul，然后再分别进每种单个杂质对照品溶液10ul，以便确定混合溶液出峰中对应的杂质出峰时间；

步骤五：进以乙腈为空白溶液1针，然后进Fmoc-Arg(pbf)-OH,通过面积归一法积分，得到纯度。

此方法提供的Fmoc-Pbf-精氨酸有关物质检测方法，检测速度较快，结果准确，杂质分离度好，方法步骤简单，便于操作，具有广阔的应用前景。