对Hepa 1-6/小鼠肝癌细胞的相关研究

背景及概述^[1]

Hepa 1-6 小鼠肝癌细胞株源自 C57/L 小鼠中引发的 BW7756 肝癌。 Hepa 1-6 小鼠肝癌细胞株可以在无血清的培养基中繁殖，培养基成分是： DMEM，75%； Waymouth’s MAB 87/3 培养基。生长特性：贴壁。传代方式：0.25%胰酶消化（可以含 EDTA）。

相关研究^[2-4]

麦静愔等人观察了MiR-384对HFFA诱导的Hepa1-6细胞sirt3/FOX01信号通路的影响。方法取Hepa1-6细胞，加入OA和PA储存液，使两者终浓度分别为1 mmol/L和0.5 mmol/L，培养24 h，建立非酒精性脂肪性肝炎体外细胞模型。测定肝细胞内活性氧水平评估模型建立的情况。分别以miR-384模拟物、miR-ctrl、miR-384抑制剂、miR-384抑制剂-ctrl、沉默信息调节因子3(Sirt3)或si-ctrl转染细胞48 h。

使用FCM测定各组细胞ROS水平，采用Western blot法检测各组细胞sirt3、FOX01及抗氧化蛋白锰超氧化物歧化酶(MnSOD)和抗氧化蛋白过氧化氢酶(CAT)表达，采用专用试剂盒检测SOD和CAT活性。结果与正常组(0.66±0.01)比，miR-384模拟物组和sisirt3组细胞内活性氧(ROS)水平显著升高[分别为(37.3±1.13)和(10.4±0.36)，P<0.01]；与HFFA组(29.4±0.98)比，HFFA/miR-384抑制剂组细胞ROS水平显著降低[(12.8±0.41)，P<0.01]；与正常组(0.75±0.04)Hepa1-6细胞sirt3蛋白表达水平比，HFFA组显著降低[(0.23±0.01)，P<0.01]；与HFFA组比，HFFA/sirt3组显著增加[(0.83±0.03)，P<0.01]；与HFFA/sirt3组比，HFFA/sirt3/miR-384组显著降低[(0.46±0.02)，P<0.01]；与对照组比，miR-384模拟物组Hepa1-6细胞sirt3蛋白、Forkhead转录因子O亚家族(FOXO)成员FOX01蛋白表达显著减少[分别为(0.2±0.01)和(0.3±0.01)，P<0.01]，而CAT和MnSOD表达显著增加[分别为(2.3±0.05)和(2.4±0.06)，P<0.01]；与HFFA组比，HFFA/miR-384抑制剂组Hepa1-6细胞sirt3蛋白和FOX01蛋白表达显著增加[分别为(0.5±0.02)和(0.7±0.01)，P<0.01]，MnSOD和CAT表达水平显著降低[分别为(1.6±0.04)和(2.0±0.03)，P<0.01]；与NAFLD组SOD(327±3.45)和CAT(386±4.03)活性比，正常组SOD和CAT[分别为(425±5.49)和(512±6.04)，P<0.01]和miR-384抑制剂组SOD和CAT活性[分别为(406±4.79)和(447±5.38)，P<0.01]显著升高。结论 miR-384表达可导致HFFA诱导的Hepa1-6细胞氧化损伤加重，部分可能是通过抑制sirt3/FOX01途径实现的。

朱伟等人探讨了SFRP5过表达和表达抑制对小鼠肝癌细胞Hepa1-6糖代谢相关基因的影响。方法分别用空载病毒(Ad-GFP)、SFRP5过表达(Ad-SFRP5)及抑制病毒(Ad-sh SFRP5)感染小鼠肝癌细胞Hepa1-6，通过real-time PCR和Western blot测定细胞中病毒感染效率；用葡萄糖氧化酶(GOD)法测定细胞的葡萄糖摄取率(GUR)；采用real-time PCR和Western blot检测肝糖异生指标(PEPCK和G6Pase)，经典胰岛素信号通路分子(InsR和AKT)的磷酸化水平。结果在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中，与Ad-GFP组相比，Ad-SFRP5病毒可明显上调SFRP5基因的表达，而Ad-sh SFRP5则相反。与Ad-GFP组相比，SFRP5基因上调可提高葡萄糖摄取率，降低PEPCK和G6Pase mRNA(P<0.01)和蛋白水平(P<0.05)，增强胰岛素信号通路分子InsR(P<0.01)和AKT(P<0.05)的磷酸化水平，而抑制SFRP5则作用相反。结论 SFRP5基因在Hepa1-6细胞中过表达，可改善糖代谢紊乱，降低肝细胞糖异生，增强胰岛素敏感性，改善胰岛素抵抗。

方姝煜等人探讨了不同浓度全反式维甲酸(ATRA)对小鼠肝癌细胞Hepa1-6成熟分化及细胞自噬水平的影响。方法以小鼠肝癌细胞Hepa1-6为研究对象，分别给予0.1、1、10μmol/L浓度的ATRA处理，荧光定量PCR和Western blot检测肝细胞相关标志基因的表达，吲哚菁绿(ICG)及过碘酸-希夫(PAS)染色检测小鼠肝癌细胞Hepa1-6的成熟功能，透射电镜观测细胞连接及自噬小体，选择最适的ATRA作用浓度；Western blot检测自噬相关标志蛋白的表达，ptf LC3质粒转染细胞后共聚焦观察自噬流变化，检测自噬流是否通畅。结果相较于空白对照组，ATRA可呈浓度依赖性抑制肝前体标志蛋白AFP的表达，并促进肝细胞成熟标志ALB、CK18、TAT和Apo B的表达，ICG及PAS染色提示阳性细胞数明显增多；透射电镜结果显示ATRA诱导组的紧密连接和细胞骨架明显增多，可见高尔基复合体以及较多的自噬小体和自噬溶酶体。均以10μmol/L组最为显著，作为最适终浓度。自噬相关标志蛋白LC3-II、Beclin-1、RAB7、P62的表达不同程度增高，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值明显增加(P<0.05)，激光共聚焦可见10μmol/LATRA处理组细胞胞浆内绿色亮点的自噬小体及红色亮点的自噬溶酶体均较对照组明显增多。结论 ATRA可诱导小鼠肝癌细胞Hepa1-6的成熟分化，并促进细胞自噬水平增高。

主要参考资料

[1] Hepa 1-6 小鼠肝癌细胞株使用说明

[2] 麦静愔，陈天阳，平键，成扬，陈建杰.MiR-384对HFFA诱导的Hepa1-6细胞sirt3/FOX01信号通路的影响[J].实用肝脏病杂志，2018，21(06):829-832.

[3] 朱伟，郑世霞，柯琳秋，汪毅，陈琼科，夏道涵，王红漫.SFRP5对小鼠肝癌细胞系Hepa1-6糖代谢的影响[J].基础医学与临床，2018，38(09):1268-1273.

[4] 方姝煜，崔洁洁，龚梦嘉，何昀，张敬芳，毕杨.全反式维甲酸诱导肝癌细胞Hepa1-6成熟和分化过程中的自噬[J].南方医科大学学报，2018，38(05):527-533.