WEE1抗体的应用

背景^[1-3]

WEE1抗体是针对WEE1蛋白的特异性抗体。WEE1蛋白在细胞周期调控中起着关键作用，特别是在G2/M期转换的抑制过程中。因此，WEE1抗体在科研实验中常被用于研究细胞周期、DNA损伤响应以及癌症等相关领域的生物学过程。

WEE1抗体

WEE1抗体的制备过程可能涉及以下步骤：

1.抗原制备：首先需要制备WEE1蛋白或其特定的抗原片段。这个片段应该包含WEE1的免疫原性区域，以便能够引发免疫反应。

2.免疫动物：将WEE1抗原注射到免疫原性动物（如兔子、小鼠等）中，以激发其免疫系统产生抗体。这通常通过多次注射（称为加强注射）来完成，以增强免疫反应。

3.收集血清：在免疫接种后，收集动物的血液样本，并从中分离出血清。血清中含有对抗原（即WEE1）的特异性抗体。

4.纯化抗体：使用各种色谱技术和亲和纯化方法（如蛋白质A/G亲和色谱、抗原亲和色谱等）从血清中分离和纯化WEE1抗体。

纯化后的WEE1抗体可以用于多种实验技术中，如免疫组化、蛋白质印迹（Western Blotting）等，以检测WEE1蛋白在细胞和组织中的表达水平，并研究其在生物学过程中的功能和机制。

WEE1在许多生物过程中都起着关键作用，包括细胞周期调控、DNA损伤应答、肿瘤发生等。因此，WEE1抗体在生物学研究和临床诊断中具有重要应用价值。例如，研究发现WEE1在多种癌症(如乳腺癌、卵巢癌、结直肠癌等)中高表达，因此WEE1抗体可以作为这些癌症的生物标志物。此外，WEE1抑制剂也被用于治疗某些类型的癌症，因此了解WEE1在肿瘤组织中的表达和分布对于评估治疗效果和预测预后具有重要意义。

应用^[4][5]

WEE1抗体可以用于肺癌预后相关长链非编码RNA的筛选与功能研究

构建了30例吸烟肺癌患者和30例不吸烟肺癌患者的肿瘤组织及其对应癌旁组织的转录组文库,通过二代测序获得转录组数据。首先,我们运用本实验室前期发展的鉴定lnc RNA的生物信息学平台对重建的转录组数据进行分析,筛选出了在肿瘤中显著差异表达、可能具有重要调控功能的lnc RNAs;其次,从TCGA数据库下载了541个肺腺癌样本(其中包括485个肿瘤组织和56个癌旁组织)的转录组数据及预后数据,在差异表达lnc RNAs的基础上进一步筛选出预后相关的lnc RNAs;然后,通过初步的细胞功能学实验验证,最终确定lnc RNA LCAT2(Lung cancer associated transcript 2)作为后续深入研究对象。

WEE1抗体结果:1.LCAT2在肺癌组织中表达上调,其表达量与肺癌病人的预后成负相关。通过对我们构建Kaplan-Meier曲线和Cox回归分析显示,LCAT2的高表达与NSCLC患者的总生存期和无复发生存期显著负相关。此外,我们在重新收集的50对肺癌样本中对LCAT2表达情况进行了独立验证,WEE1抗体结果表明,相对于癌旁组织,LCAT2在肿瘤组织中显著高表达。

2.敲低LCAT2抑制肺癌细胞的增殖能力。CCK-8和Ed U实验结果表明,在LCAT2相对高表达的肺癌细胞系(A549、H460、Calu1和Hop62)中敲低LCAT2,显著抑制了细胞的增殖;在LCAT2相对低表达的肺癌细胞系(H1299和H1703)中过表达LCAT2,能促进细胞的增殖。此外,细胞周期实验结果表明,在A549和H460里敲低LCAT2,细胞周期主要阻滞在G0/G1期;在Calu1和Hop62里敲低LCAT2,细胞周期主要阻滞在G2/M期。

3.敲低LCAT2抑制了肺癌细胞的转移能力。Transwell小室实验结果表明,在A549、H460、Calu1和Hop62中敲低LCAT2对NSCLC细胞的迁移和侵袭能力具有一定的抑制作用。而在细胞系H1299和H1703中过表达LCAT2时,对细胞的迁移和侵袭能力有一定的促进作用。

4.沉默LCAT2能使多种重要蛋白的表达发生改变。WEE1抗体Western Blot实验检测结果显示,敲低LCAT2后,参与细胞周期调控的蛋白CCND1、CCNB1、Wee1等,以及参与EMT过程的E-Cadherin、Snai、N-Cadherin等发生显著变化。

参考文献

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[2]Across the Globe:Proteogenomic Landscapes of Lung Cancer[J].Gali Yanovich-Arad;;Tamar Geiger.Cell,2020

[3]Linc-ROR promotes the progression of breast cancer and decreases the sensitivity to rapamycin through miR-194-3p targeting MECP2.[J].Zhou Qian;;Guo Juan;;Huang Wenjie;;Yu Xiaosi;;Xu Chen;;Long Xinghua.Molecular oncology,2020

[4]Long non-coding RNA ANCR promotes progression of NSCLC by inhibiting E-Ca expression.[J].Zhou T;;Fang J-J;;Zhou Y-X;;Li Z-P;;Jiang L;;Han W-W;;Zhu Z-H.European review for medical and pharmacological sciences,2020

[5]易佳妮.肺癌预后相关长链非编码RNA的筛选与功能研究[D].浙江大学,2023.