GLI1抗体的应用

背景^[1-3]

GLI1抗体是一种非偶联、分子量约118kDa的兔源、抗GLI1单克隆抗体或多克隆抗体。它可以用于小鼠、大鼠背景下的WB（Western Blot，蛋白质印迹法）和IHC-P（免疫组织化学染色）实验，并且不带标记。

GLI1（Glioma-associated oncogene homolog 1）是一个与胶质瘤相关的原癌基因同源物1，也被称为GLI。该基因的全名是glioma-associated oncogene homolog 1(zinc finger protein)，即胶质瘤相关癌基因同源物1（锌指蛋白）。

GLI1抗体的使用应遵循其使用指南，并确保储存条件正确，以确保其活性和使用效果。GLI1抗体的储存，短期储存条件通常为+4°C，而长时间存储则建议在-20°C下。如果经常使用，可以在4°C下保存，但-20°C保存不应超过一年，并且应尽量避免反复冻融。

GLI1抗体

此外，GLI1抗体的应用类型和稀释倍数可能因实验需求而有所不同。例如，在印迹实验中，稀释倍数可能是1:50-400；在细胞化学和组织化学（冰冻切片）中，稀释倍数可能是1:50-500；在酶联吸附试验中，稀释倍数可能是1:100-1:5000。

GLI1蛋白属于Hedgehog信号通路的一部分，这是一个在多种生物过程中发挥作用的细胞信号转导途径，包括胚胎发育、组织再生以及某些类型的癌症。在医学研究中，GLI1的异常表达或活性与多种疾病状态有关，特别是某些类型的癌症。

对于GLI1抗体的检测，通常用于诊断或监测涉及Hedgehog信号通路异常的疾病，如基底细胞癌、髓母细胞瘤等。

应用^[4][5]

GLI1抗体可以用于Gli1-OPN轴对胰腺癌细胞及EMSCs生物学行为的调控作用及其机制研究

Hh配体非依赖的Gli1直接诱导OPN表达,促进Bx PC-3细胞的生物学行为目的:在胰腺癌细胞中研究Gli1调节OPN的表达,及其对胰腺癌生物学行为的作用和机制。

方法:1.下载GEPIA数据库中来自PAAD的胰腺肿瘤的RNA测序数据,采用生物信息学对音猥因子(Sonic hedgehog,Shh)和Gli1分别与OPN m RNA表达的相关性进行分析;并以GLI1抗体免疫组化验证胰腺癌组织中Shh、Gli1与OPN的共表达情况。采用q RT-PCR及GLI1抗体Western blot检测Bx PC-3细胞中Shh和Gli1的表达水平。

2. 检测sh-OPN-Bx PC-3细胞Gli1的表达水平。再分别用Smo抑制剂环巴胺和Gli抑制剂GANT61处理Bx PC-3细胞,GLI1抗体验证OPN m RNA和蛋白表达的变化。然后构建sh-Gli1-Bx PC-3稳转细胞,观察其OPN的表达改变,同时预测OPN启动子上Gli1的结合位点,采用双荧光素酶报告基因和Ch IP试验验证Gli1对OPN转录的直接调节。以rh OPN刺激sh-Gli1-Bx PC-3细胞,观察其是否可逆转Gli1敲低引起的细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和CSC标志表达的改变。将sh-Gli-Bx PC-3细胞接种至裸鼠皮下,观察种植瘤的生长及OPN的表达。

结果:1.生物信息学分析结果表明人胰腺癌中Gli1与OPN表达具有正相关。GLI1抗体免疫组化发现53%的胰腺癌组织中可见Gli1和OPN的共表达,Bx PC-3细胞表达Shh和Gli1的m RNA,但表达19 k D的Shh活性蛋白水平很低。2.sh-OPN仅轻微下调Bx PC-3细胞表达Gli1,而sh-Gli1则显著抑制OPN表达;GANT61也显著抑制OPN表达,但环巴胺无此作用;Gli1直接结合OPN启动子,且在敲低Gli1的胰腺癌细胞sh-Gli1-Bx PC-3中OPN启动子的富集率降低。3.sh-Gli1-Bx PC-3细胞增殖和迁移均显著受到抑制,侵袭也有抑制,细胞凋亡增多,且干细胞标志表达减少。补充rh OPN,可部分逆转其增殖、迁移、凋亡和干性分子表达的变化,但对侵袭的影响不显著。4.sh-Gli1-Bx PC-3细胞接种20天后组织全部萎缩消失,而对照组肿瘤组织生长正常。结论:非经典通路活化的Gli1可直接促进OPN的表达,并部分通过OPN促进胰腺癌细胞生长、转移,抑制细胞凋亡。

参考文献

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