T4RNA连接酶2的相关介绍

背景及概述^[1]

T4RNALigase是以不依赖于模板的形式催化供体核酸的5'-磷酰基末端和受体核酸的3'-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶活性依赖ATP，可作用于广泛的底物，包括RNA，DNA，寡核糖核酸、寡脱氧核糖核酸和很多其它核酸衍生物。T4RNALigase2主要用于RNA5´末端加寡聚核酸用于映射和测序5´端，或用于cDNA合成(RACE)；用于3'-末端RNA标记；用于连接RNA和DNA；用于修饰或突变RNA。有研究为T3DNA连接酶和T4RNALigase2提供一种在RNA上m6A百分比含量的定量分析中的新应用，首次发现T3DNA连接酶和T4RNALIGASE2对m6A敏感，与A相比，m6A可以抑制T3DNA连接酶和T4RNALIGASE2的连接活性，基于该特性，以RNA(含的A的RNA和含有m6A的RNA)为模板，建立了基于连接-聚合酶链式反应定量测定m6A百分比含量的方法。

该方法首先确定RNA上的待测位点(待测位点是腺嘌呤，可能含有部分N6甲基腺嘌呤，当待测位点是m6A时，连接酶T3DNA连接酶或T4RNALIGASE2的连接活性被抑制，左探针和右探针不会被连接；当待测位点是A时，连接酶会将左探针和右探针连接起来)，用相应的标准曲线定量该待测位点A的含量，其次在该RNA的待测位点附近选择一个不含m6A的A位点作为参比位点，用相应的标准曲线定量该参比位点A的含量，然后用参比为点A的含量减去待测位点A的含量得到待测位点m6A的含量，用待测位点m6A的含量除以待测位点A和m6A的总和，即可得到该待测位点m6A的百分比含量。

主要参考资料

[1] CN201611020857.5 T3DNA连接酶和T4RNA连接酶2在检测N⁶甲基腺嘌呤中的应用