免疫染色封闭液的应用

背景^[1-3]

免疫染色封闭液是一种用于免疫组化或免疫荧光染色的试剂，其主要作用是防止非特异性染色和背景噪音。该液体通常由抗体、聚合物和其他化学物质组成，可以与细胞或组织中的抗原结合，形成复合物，从而使特异性染色更加明显和准确。

免疫染色封闭液通常需要在染色前预先加入到样品中，并与抗体一起孵育。孵育时间和温度等因素可能会影响封闭液的效果，因此需要根据具体的实验条件进行优化。在封闭液中，聚合物通常起到交联作用，使抗体与抗原结合更加牢固，从而减少非特异性染色的发生。

除了用于免疫组化和免疫荧光染色外，免疫染色封闭液还可以用于其他一些实验中，如Western blotting、ELISA等。在这些实验中，封闭液的作用是防止非特异性抗体与膜上的蛋白质结合，从而减少背景噪音和假阳性结果的发生。

免疫染色封闭液

免疫染色封闭液是在免疫染色过程中使用的一种液体，其主要作用是封闭样本中的非特异性抗原，以减少背景染色和干扰因素。它通常含有可溶性蛋白、血清或血清替代物，以及补体或其他阻断剂，这些成分能够阻塞非特异性结合位点，降低非特异性结合和背景信号。

使用免疫染色封闭液的一般步骤包括：首先，固定并洗涤细胞或组织样本，确保样本的清洁；然后，加入适量免疫染色封闭液，使其完全覆盖样本；接着，在摇床上缓慢摇动，通常封闭60分钟；最后，进行一抗孵育等后续操作。

免疫染色封闭液仅可用于科研实验，严禁用于其他非科研用途。在使用过程中，应严格遵循产品说明和相关操作规范，确保实验结果的准确性和可靠性。

应用^[4-5]

免疫染色封闭液可以用于人参皂苷Rd对氧化低密度脂蛋白活化肝星状细胞的抑制作用及其机制的初步研究

采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)活化HSCs为模型,探讨人参皂苷Rd在肝纤维化中的作用及其相关机制,为人参皂苷Rd成药提供思路。方法1 MTT法检测人参皂苷Rd对HSCs活力和增殖的影响96孔板中接种细胞,每组6个复孔。12小时后加药处理,继续培养24小时和48小时后加入MTT工作液,再继续培养4小时后加入DMSO终止液,摇匀后492 nm测吸光度值。2 ox-LDL活化HSCs完全培养基培养细胞株HSC-T6,待细胞长至培养瓶底面积80%时,消化细胞并接种24孔板,12小时后加入10μg/ml ox-LDL,继续培养48小时。3实验分组及加药处理实验分为4组:空白对照组、模型组、低剂量组、高剂量组;按照每孔2.5×105个细胞接种12孔板,12小时后按上述分组依次加入PBS、10μg/ml ox-LDL、10μg/ml ox-LDL+20μmol/L Rd、10μg/ml ox-LDL+40μmol/L Rd,继续培养48小时。4胆固醇氧化酶终点法检测HSCs总胆固醇含量细胞培养及加药处理后,离心收集细胞沉淀并分成两份,采用RIPA裂解液提取总蛋白和异丙醇加超声提取总胆固醇;采用BCA法测定蛋白总浓度,使用胆固醇(CHO酶法)试剂盒测定总胆固醇含量;以各分组细胞总胆固醇/各分组细胞总蛋白(mg/g)作为各分组细胞总胆固醇含量的比较。5油红染色法观察HSCs脂质摄入6孔板中细胞爬片及加药处理,4%多聚甲醛固定细胞,去离子水洗片,加入油红工作液避光染色,60%异丙醇漂洗后去离子水洗净,显微镜下观察拍照。6免疫荧光检测HSCs胶原蛋白表达6孔板中细胞爬片及加药处理,4%多聚甲醛固定细胞,免疫染色封闭液室温封闭,滴加Anti-Collagen I抗体后于保湿盒中4℃避光孵育过夜;加入FITC标记羊抗兔IgG,室温避光孵育后DAPI染色,避光漂洗后加入抗荧光淬灭封片液,倒置荧光显微镜观察拍照。

参考文献

[1]The stellate cell system(vitamin A-storing cell system)[J].Haruki Senoo;;Yoshihiro Mezaki;;Mutsunori Fujiwara.Anatomical Science International,2017(4)

[2]Ginsenoside Rd and ischemic stroke;a short review of literatures[J].Seyed Fazel Nabavi;;Antoni Sureda;;Solomon Habtemariam;;Seyed Mohammad Nabavi.Journal of Ginseng Research,2015(4)

[3]Macrophage autophagy protects against liver fibrosis in mice[J].Jasper Lodder;;TimothéDena?s;;Marie-No?le Chobert;;JingHong Wan;;Jamel El-Benna;;Jean-Michel Pawlotsky;;Sophie Lotersztajn;;Fatima Teixeira-Clerc.Autophagy,2015(8)

[4]Ginsenoside Rd attenuates Aβ25–35-induced oxidative stress and apoptosis in primary cultured hippocampal neurons[J].Juan-fang Liu;;Xiao-dong Yan;;Lin-song Qi;;Ling Li;;Geng-yao Hu;;Peng Li;;Gang Zhao.Chemico-Biological Interactions,2015

[5]李小勇.人参皂苷Rd对氧化低密度脂蛋白活化肝星状细胞的抑制作用及其机制的初步研究[D].第三军医大学,2018.