二苯胺鉴定DNA的原理是什么？

二苯胺是一种带有花香的固体结晶有机化合物。它可以是灰白色，棕褐色或棕色/琥珀色。材料的颜色取决于暴露在空气和光线中的数量和时间。不溶于水。二苯胺主要用于合成橡胶抗氧化剂，染料，医药中间体，润滑油抗氧化剂和火药稳定剂。本文将介绍其在DNA鉴定中的应用。

二苯胺试剂的配制方法

1、称取1.5g二苯胺，溶于100mL冰乙酸中。

2、在溶液中加入1.5mL浓硫酸，用棕色瓶保存。

3、临用前，在10mL的上述溶液中再加入0.1mL体积分数为0.2%的乙醛溶液。

4、二苯胺试剂要现配现用，以保证实验效果。

DNA的鉴定原理及冷却原因

DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，后者再和二苯胺试剂作用呈现蓝色。二苯胺与DNA的颜色反应实质是：酸性条件（H离子）催化嘌呤脱氧核苷酸中糖苷键的断裂先形成游离的脱氧核糖，进而形成ω-羟基-γ-酮基戊醛，ω-羟基-γ-酮基戊醛与二苯胺发生颜色反应。水浴加热促进了糖苷键的断裂，因而更有利于增强二苯胺试剂对DNA检测的敏感性。

加入二苯胺试剂后沸水浴处理的时间要在5min以上，且要等到冷却后再观察结果，这样才可以观察到较为明显的显色反应。

关于DNA含量粗略测定

鉴定时溶液蓝色的深浅，与溶液中DNA含量的多少有关，可以加入适量乙醛，以提高反应的灵敏度。

DNA与二苯胺试剂反应后的溶液对波长为595m的光有最大吸收峰，并且DNA的含量在一定范围时，吸光度的值与DNA的含量成正比，利用这个原理可以测定DNA的含量。