人干扰素调节因子(IRF)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人干扰素调节因子(IRF)ELISA KIT是一种专门用于检测人体中干扰素调节因子（IRF）的酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒。IRF是一类重要的转录因子，能够调节干扰素（IFN）以及其他相关基因的表达，从而在免疫反应、细胞增殖、分化以及抗病毒等方面发挥关键作用。

使用人干扰素调节因子(IRF)ELISA KIT，可以定量检测血清、血浆、细胞培养上清液以及其他生物样本中的IRF含量。通过这一方法，研究人员可以了解IRF在生理和病理状态下的表达情况，进一步揭示其在免疫调节、抗病毒反应等方面的作用机制。

人干扰素调节因子(IRF)ELISA KIT的使用通常包括样本准备、加样、孵育、洗涤、显色和读数等步骤。具体操作应严格按照试剂盒说明书进行，以确保实验结果的准确性和可靠性。

人干扰素调节因子(IRF)ELISA KIT

人干扰素调节因子（IRF）ELISA Kit的使用方法主要遵循酶联免疫吸附实验（ELISA）的标准操作。以下是一般性的使用步骤，但请注意，具体步骤可能会因不同的试剂盒品牌或实验要求而有所差异，因此在使用前应详细阅读产品说明书：

1.准备试剂和样本：

将所有试剂和样本平衡至室温。

根据说明书准备所需的试剂，如洗涤液、标准品、酶标抗体等。

根据实验需要准备样本，如血清、血浆或其他生物样本。

2.样本处理：

根据样本类型，可能需要进行稀释、离心或其他预处理步骤。

确保样本中不含任何可能影响实验结果的物质。

3.加样：

按照说明书，在相应的孔或条带中加入标准品和样本。

确保加样量准确，避免交叉污染。

4.孵育：

在指定温度下，对加入样本的孔进行孵育，使样本中的抗原与固定在板上的抗体结合。

注意控制孵育时间，避免过长或过短。

5.洗涤：

使用洗涤液去除未结合的抗原和杂质。

重复洗涤数次，确保洗涤彻底。

6.加酶标抗体：

加入酶标记的抗体，使其与已结合的抗原发生反应。

再次进行孵育和洗涤。

7.显色反应：

加入底物溶液，酶催化底物产生有色产物。

控制显色时间，避免颜色过深或过浅。

8.终止反应与读数：

加入终止液，停止显色反应。

使用酶标仪读取各孔的光密度（OD）值。

9.数据分析：

根据标准品的数据绘制标准曲线，然后根据样本的OD值计算其浓度或含量。

结合实验目的和背景，对结果进行解释和分析。

应用^[4-5]

人干扰素调节因子(IRF)ELISA KIT可以用于IRF-4在急性肾损伤后期炎症反应和肾纤维化中的作用

研究采用IRF-4基因敲除小鼠,在叶酸(Folic acid,FA)诱导AKI小鼠模型上探讨IRF-4对叶酸所致的AKI后期炎症反应和肾纤维化的调节作用,为防治AKI慢性转化提供参考。

方法:本研究采用C57BL/6野生(WT)小鼠和IRF-4基因敲除(IRF-4 KO)小鼠,构建叶酸(FA)诱导的AKI模型。实验分为4部分,采用WT小鼠建模后于第3、7、14天取材,采用HE染色和Sirius染色观察肾小管损伤评分和胞外胶原蛋白沉积面积占比指标;第2部分采用WT小鼠建模后于第14天取材,采用人干扰素调节因子(IRF)ELISA KIT、免疫组化和蛋白印迹检测IRF-4阳性细胞计数和IRF-4蛋白表达水平指标,;第3部分采用WT小鼠和IRF-4 KO小鼠建模后于第14天取材,采用HE染色、免疫组化、real-time PCR检测肾小管损伤评分、CD3阳性细胞和F4/80阳性细胞计数、促炎因子CXCL16、IL-18、IL-6mRNA水平指标;

采用WT小鼠和IRF-4 KO小鼠建模后于第14天取材,采用Sirius染色、real-time PCR检测胞外胶原蛋白沉积面积占比、TGF-β1 mRNA水平,采用免疫荧光单染色检测α-SMA、Fibronectin和Collagen I阳性面积占比,采用免疫荧光双染色法检测CD45-α-SMA、F4/80-α-SMA、CD206-α-SMA双阳性细胞计数指标。采用IBM SPSS Statistics 25.0软件进行数据分析,正态分布数据计数资料采用均数±标准误差(mean±SEM)表示。组间的差异采用单因素方差分析(one-way analysis of variance,ANOVA),方差齐时使用LSD法分析,方差不齐时使用Tamhane T2法分析,P值<0.05为有统计学意义。

人干扰素调节因子(IRF)ELISA KIT结果:FA诱导的AKI小鼠模型的肾脏表现出进行性肾小管损伤和纤维化;FA诱导的WT小鼠AKI模型中肾脏的IRF-4表达上调:与WT小鼠相比,敲除IRF-4基因后FA诱导的AKI模型中肾小管损伤评分、CD3阳性细胞和F4/80阳性细胞计数减少,促炎因子CXCL16、IL-18、IL-6 mRNA水平下调;与WT小鼠相比,敲除IRF-4基因后FA诱导的AKI模型中胞外胶原蛋白沉积面积占比、TGF-β1 mRNA水平下调,α-SMA、Fibronectin和Collagen I阳性面积占比减少,CD45-α-SMA、F4/80-α-SMA、CD206-α-SMA双阳性细胞计数降低。

参考文献

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[3]Deletion of Myeloid Interferon Regulatory Factor 4(Irf4)in Mouse Model Protects against Kidney Fibrosis after Ischemic Injury by Decreased Macrophage Recruitment and Activation.[J].Sasaki Kensuke;Terker Andrew S;Pan Yu;Li Zhilian;Cao Shirong;Wang Yinqiu;Niu Aolei;Wang Suwan;Fan Xiaofeng;Zhang MingZhi;Harris Raymond C.Journal of the American Society of Nephrology:JASN,2021

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[5]陈美欣.IRF-4在急性肾损伤后期炎症反应和肾纤维化中的作用[D].南方医科大学,2024.