高灵敏检测精胺的方法

简介

精胺是含有两个氨基和两个亚氨基的多胺类物质，在生物体内由腐胺（丁二胺）和S-腺苷蛋氨酸经多种酶催化后生成。它与亚精胺都存在于细菌和大多数动物细胞中，是促进细胞增殖的重要物质。在酸性条件下，它呈现出多阳离子多胺类特性，并能与病毒与细菌中DNA结合。使DNA分子具有更大的稳定性与柔韧性，也是细胞培养液中必要组分之一。

背景技术

生物胺(Biogenic amines, BA)主要包括精胺(Spermine,SPM)、腐胺(Putrescine,PUT)和亚精胺(Spermidine,SPD)，通过微生物产生的活性物质在食物的储存和加工过程中形成，广泛存在于食品中，易对生物胺敏感人群健康造成危害)。研究发现，癌症患者体内精胺水平会显著增加，临床上将精胺水平作为早期诊断肿瘤的标志物和治疗效果的评价指标之一，但对于精胺代谢改变的具体机制尚不完全清楚。因此，检测精胺含量对于保证消费者的健康具有重要意义。然而，除个别规定外，我国以及欧洲对于食物中精胺含量均未做出明确限定和要求。近年来，由于食品安全问题频频发生，引起了人们对食品安全的高度重视，食品中精胺含量检测成为近年研究热点。目前，精胺检测分析方法主要包括高效液相色谱法(HPLC)、毛细管电泳法等，这些方法对操作人员的技术要求较高，操作繁琐。因此，灵敏、有效的检测方法，对于食品质量监测、保护消费者健康具有重要的现实意义。

检测方法

1、紫脲酸铵保护的金纳米簇(MU-Au NCs)的合成

在4.48mL二次蒸馏水中加入520uL 48mmol/L氯金酸溶液，30℃恒温水浴和磁力搅拌下，将5mL 10mmol/L紫脲酸铵溶液逐滴加到上述溶液中，反应30min后取出，14000r/min离心20min，取上清液，透析48h，收集透析内液，即得到紫脲酸铵保护的金纳米簇(MU-Au NCs)，4℃保存备用。

2、对精胺的检测

取2mL MU-Au NCs溶液用pH7.0的PBS缓冲液稀释至3mL，分别加入500uL不同浓度的标准精胺溶液(以二次蒸馏水为空白样品)，混合均，反应30min后进行荧光检测。空白样与待测样品荧光强度差值用△F(△F=F₀-F₁)表示，荧光猝灭程度用(F₀-F₁)/F₀表示，其中F₀和F₁分别代表空白溶液和样品溶液的荧光强度。

参考文献

[1]安晓刚,杜捷,齐伟男,等. 金纳米簇荧光猝灭型探针高灵敏检测精胺[J]. 分析化学,2017,45(8):1209-1214. DOI:10.11895/j.issn.0253-3820.160865.