CRFK/猫肾细胞的介绍

发布日期:2020/2/5 10:44:14

背景及概述[1]

CRFK/猫肾细胞传代建议：1：2~1：3传代，2~3天换液1次，细胞质检情况：不含细菌、真菌、支原体等微生物污染。CRFK/猫肾细胞培养条件RPMI-1640+10%FBS+1%P/S；生长条件为气相：5%CO2、95%空气；温度：37℃；冻存条件为90%FBS+10%DMSO。CRFK/猫肾细胞细胞不含细菌、真菌、支原体等微生物污染。有试验研究对不同毒力水貂阿留申病毒(AMDV)在CRFK/猫肾细胞中的增殖规律及其诱导细胞凋亡情况进行比较研究。将标准毒株AMDV-G及分离到的野毒株AMDVDL124、AMDV-DL125、AMDV-QD2、AMDV-QD3、AMDV-ZJ3接种CRFK/猫肾细胞，应用间接免疫荧光、实时荧光定量PCR、TCID50测定技术研究病毒在细胞中的复制及表达情况，同时检测病毒诱导的细胞凋亡情况。

间接免疫荧光结果显示，5株野毒株荧光着色趋势差异不大，均在感染后12h出现荧光，随感染时间延长荧光增多，AMDV-G荧光出现时间比野毒株晚，但病毒感染后72h几乎所有细胞均出现荧光；实时荧光定量PCR结果显示，基因组复制趋势大致相同，AMDV-DL125感染后3h复制开始，AMDV-G感染后24h复制才开始并呈快速增长趋势，但感染后72h均达到峰值。TCID50检测结果表明，0～12h为病毒感染潜伏期，AMDV-G感染后60h达到峰值，野毒株均在感染后72h达到峰值，但是6株病毒均能在感染后48～72h维持较高的感染滴度，其后随细胞崩解而降低。SPSS23.0统计软件分析凋亡检测结果显示，与对照组相比，野毒株感染细胞后2～12h诱导细胞凋亡差异显著，AMDV-G诱导细胞凋亡差异明显低于野毒株，但是诱导细胞凋亡时间较野毒株长，在感染后24h仍对细胞凋亡有较明显的诱导作用，但是各病毒诱导的细胞凋亡主要集中在2～12h。该结果为AMDV的培养、鉴定及致病机理研究提供一定参考。