什么是TBS缓冲液

简介

三羟甲基氨基甲烷简称Tris，分子式为C₄H₁₁NO₃。分子中的氨基(-NH₂)为碱性，因此Tris是一种弱碱，常与盐酸构成缓冲溶液，简称TBS或Tris-HCl缓冲液。TBS缓冲液一般由一定质量的Tris溶于蒸馏水中，再用HCl调节至适合的pH值。在配制时还需加入NaCl以维持溶液等渗。因TBS缓冲液的pH值受溶液浓度、温度影响较大，以及易与空气中的CO₂反应，所以在使用时需现用现配制。

TBS缓冲液的缓冲原理为：Tris中的-NH2与HCl结合生成Tris·HCl盐。季铵基团Tris·H+与Tris形成缓冲对，溶液中存在Tris·H⁺+H₂O=Tris⁺H₃O⁺平衡关系，凭借该平衡移动来发挥缓冲作用。其缓冲范围一般为7.0~9.0101。由于Tris对生化过程干扰很小，不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀，所以在DNA、蛋白质等生物大分子实验中经常应用，TBS缓冲溶液可以做DNA、蛋白质的溶解液或提取液，也是DNA相关研究实验中的重要缓冲液，如DNA的捕获与释放、染色体的特异性标记等方面。另外，在生物陶瓷材料研究方面，TBS缓冲液还可以作为研究过程中一些特定的生物陶瓷体外浸泡液。也用于清洗免疫染色的组织或Western Blot中的蛋白印迹膜等，是常用分子生物学试剂。TBS缓冲液还可用于免疫金银染色中清洗组织，也可作为封闭液的基础试剂。

配制方法

TBS配方：

● Tris基（1M，pH7.4）： 50ml（即0.5M的Tris缓冲液，用于维持缓冲液的酸碱度）

● 氯化钠： 75g（即0.5M的NaCl，提供缓冲液的离子强度）

● 去离子水： 400ml（用于溶解Tris基和NaCl）

制备步骤：

● 在500ml容器中加入400ml的去离子水。

● 加入50ml的1M Tris基，搅拌均匀，直到Tris完全溶解。

● 逐渐加入75g的氯化钠（NaCl），搅拌至溶解。可以使用磁力搅拌器来加速溶解过程。

● 使用pH计检测溶液的pH值，如果需要，可以使用盐酸（HCl）或氢氧化钠（NaOH）调节pH至7.4。

● 最终体积不足500ml时，使用去离子水补足至500ml。

● 用0.22微米的滤器过滤TBS缓冲液，确保无菌。

参考文献

[1]于梦雪,邹淑君. 几种缓冲溶液简介及应用[J]. 化学与粘合,2020,42(6):456-458,464. DOI:10.3969/j.issn.1001-0017.2020.06.016.