膀胱平滑肌细胞的应用

背景^[1-3]

膀胱平滑肌细胞是构成膀胱的主要细胞类型，负责膀胱的收缩和舒张功能，从而控制尿液的排放。这些细胞属于平滑肌细胞的一种，具有收缩性，能够响应神经和激素的刺激，以调节膀胱内的压力。

在医学研究中，膀胱平滑肌细胞也被广泛研究，以了解其在膀胱功能中的作用，以及在不同疾病状态下的变化。例如，膀胱活动过度（膀胱过度活跃症）或膀胱活动不足（膀胱活动低下症）等膀胱功能障碍，可能与膀胱平滑肌细胞的异常功能有关。

此外，膀胱平滑肌细胞也用于一些实验性研究，如细胞培养、药物筛选等，以评估药物对膀胱平滑肌细胞的影响，以及研究膀胱疾病的发病机制和治疗方法。

膀胱平滑肌细胞）

膀胱平滑肌细胞培养操作

1)复苏Bladder Smooth Muscle Cells：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)膀胱平滑肌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)膀胱平滑肌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

膀胱平滑肌细胞可以用于SGK1-NFAT2信号通路在膀胱出口梗阻介导膀胱平滑肌细胞增殖中的机制研究

研究从体内-体外两方面探索SGK1-NFAT2信号通路在小鼠膀胱出口梗阻(BOO)介导膀胱平滑肌细胞增殖的具体机制,为BOO所致膀胱功能损害的治疗寻找新的靶点。

方法:体内实验将雌性BALB/C小鼠尿道外口1/2缝合造成BOO 2周;体外实验予以小鼠膀胱平滑肌细胞(Bladder Smooth Muscle Cells)SGK1诱导剂地塞米松(Dexamethasone,Dex)、TRPV1抑制剂SB705498及敲低SGK1来验证TRPV1与SGK1-NFAT2信号通路的关系。通过HE染色、masson染色观察小鼠膀胱的组织形态学变化;蛋白印迹、qRTPCR和免疫组化检测Bladder Smooth Muscle Cells SGK1、TRPV1、NFAT2、PCNA的表达及分布情况;免疫共沉淀(CoIP)分析SGK1与TRPV1的作用关系;Ed U、CCK-8检测MBSMCs增殖。结果:小鼠BOO2周后较对照组膀胱重量、平滑肌厚度、胶原沉积比例和SGK1、TRPV1、NFAT2、PCNA表达明显增加。与对照组相比,Dex 10u M能促进上述4个分子表达和膀胱平滑肌细胞）增殖;而抑制TRPV1后仅SGK1表达未受影响,MBSMCs增殖受到抑制;将SGK1沉默后上述4个分子表达和膀胱平滑肌细胞增殖出现下降。CoIP提示SGK1直接作用于TRPV1。

结论:小鼠BOO可通过激活SGK1-TRPV1-NFAT2信号轴对膀胱平滑肌细胞增殖产生一定影响,进而参与BOO后膀胱重构进程,这可能对BOO的药物靶点筛选提供一种新的策略。

参考文献

[1]Feasibility of a deep learning-based diagnostic platform to evaluate lower urinary tract disorders in men using simple uroflowmetry.[J].Bang Seokhwan;Tukhtaev Sokhib;Ko Kwang Jin;Han Deok Hyun;Baek Minki;Jeon Hwang Gyun;Cho Baek Hwan;Lee KyuSung.Investigative and clinical urology,2022

[2]A review of the biological role of miRNAs in prostate cancer suppression and progression.[J].Doghish Ahmed S;Ismail Ahmed;ElMahdy Hesham A;Elkady Mohamed A;Elrebehy Mahmoud A;Sallam AlAliaa M.International journal of biological macromolecules,2021

[3]Current androgen receptor antagonists under investigation for resistant prostate cancer.[J].Nigro Maria Concetta;Mollica Veronica;Marchetti Andrea;Cheng Michael;Rosellini Matteo;Montironi Rodolfo;Cheng Liang;Massari Francesco.Expert review of anticancer therapy,2021

[4]Retraction Note:Radiation-induced glucocorticoid receptor promotes CD44+prostate cancer stem cell growth through activation of SGK1-Wnt/β-catenin signaling.[J].Chen Feng;Chen Xiaodong;Ren Yu;Weng Guobin;Keng Peter C;Chen Yuhchyau;Lee Soo Ok.Journal of molecular medicine(Berlin,Germany),2021

[5]何江枢.SGK1-NFAT2信号通路在膀胱出口梗阻介导膀胱平滑肌细胞增殖中的机制研究[D].遵义医科大学,2023.