雷公藤乙素的应用与制备

背景及概述^[1]

雷公藤又名黄藤、黄藤木、黄腊藤、黄檀根、断肠草等，属卫茅科植物。味辛、苦，性凉，有大毒，归心、肝、脾、肾经，有清热解毒，祛风除湿，舒筋活血通络，消肿止痛，杀虫止痒之功。临床常用于治疗类风湿性关节炎、慢性肾炎、红斑狼疮等难治性免疫功能亢进疾病。雷公藤乙素（Tripdiolide），又名雷公藤内酯二醇，是雷公藤中的一种二萜内酯类成分。雷公藤乙素是雷公藤的主要活性成分，也是雷公藤多苷片和雷公藤总萜片的主要有效成分。

结构

应用^[2-3]

雷公藤是治疗自身免疫疾病的药物，它含有多种有效成分，如雷公藤甲素、雷公藤乙素、雷公藤红素等。这些有效成分对多种免疫细胞有复杂的影响，包括抑制增殖、诱导凋亡及改变细胞因子分泌等。研究表明雷公藤乙素具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤以及治疗糖尿病肾病等作用，具有很好的药用开发前景。

1）治疗糖尿病。雷公藤乙素能有效降低肾脏中TGF-β1的含量，抑制TGF-β1对VEGF的诱导表达，修复和保护肾脏，对DN起到治疗的作用。以链状佐菌素(STZ)制备DN大鼠模型，雷公藤乙素、缬沙坦灌胃给药12周，实验期间检测大鼠24h尿样、血样，12周后一次性处死大鼠，对各组肾脏标本进行常规病理检测，观察DN肾脏结构的修复状况，用免疫组化SABC法检测各组肾组织内VEGF的表达，用酶联免疫(ELISA)双抗夹心法检测TGF-β1在大鼠肾组织和血清中的实际含量。结果显示雷公藤乙素能降低大鼠24h尿量、尿蛋白量、血糖(BG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)各值及TGF-β1在肾组织和血清中的含量，影响DN大鼠肾组织中VEGF和TGF-β1的表达，保护肾脏。

2）雷公藤乙素尤其适用于有毒蜂蜜的识别和鉴定，以及蜜蜂中毒人群的早期诊断。阐明有毒蜂蜜的致毒的物质基础，识别和鉴定出其生物标志物具有重要意义。有毒蜂蜜一旦流入市场，将会严重危害蜂蜜消费者的生命健康。基于有毒蜂蜜的生物标志物可以快速开发出其鉴别方法，从而为监控有毒蜂蜜的分布、流通以及蜂蜜中毒事件的快速诊断提供技术支撑。雷公藤乙素作为雷公藤和昆明山海棠的特征性化合物，通过检测蜂蜜中是否含有雷公藤乙素来鉴别蜂蜜是否含有雷公藤有毒蜂蜜。

制备^[1]

一种从雷公藤中制备雷公藤乙素的方法，该法与现有方法比较，具有提取制备过程相对简单、设备要求低、产品得率高、纯度高、适合雷公藤乙素的大规模分离制备等优势。技术方案如下：

1）将雷公藤根切片，用3～10倍量的乙醇水溶液（70%～95%）加热回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩回收乙醇得到总浸膏。将总浸膏用乙酸乙酯溶解数次至不再溶解，合并乙酸乙酯溶液，减压浓缩回收乙酸乙酯得乙酸乙酯部位。

2）将乙酸乙酯部位经10～30倍量中性氧化铝色谱柱层析，先用石油醚—乙酸乙酯（2：3，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用乙酸乙酯—甲醇（3：1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得中性氧化铝色谱柱洗脱部位。

3）将中性氧化铝色谱柱洗脱部位经MCIGEL色谱柱层析，先用甲醇—水（1：3，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用甲醇—水（1：1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得MCIGEL色谱柱洗脱部位。

4）将MCIGEL色谱柱洗脱部位经10～30倍量硅胶色谱柱层析，先用石油醚—乙酸乙酯（7：4，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用石油醚—乙酸乙酯（1：1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得硅胶色谱柱洗脱部位，并析出雷公藤乙素粗品。

5）将雷公藤乙素粗品用乙酸乙酯结晶，得到雷公藤乙素粗晶，再用乙酸乙酯重结晶1～2次，得雷公藤乙素纯晶，采用雷公藤乙素对照品对照HPLC法以及核磁共振波谱法鉴定产品。经HPLC检测雷公藤乙素含量大于99%。相对于雷公藤药材中雷公藤乙素的量，该法制得雷公藤乙素产品得率大于90%。

主要参考资料

[1] CN201610003311.2从雷公藤中制备雷公藤乙素的方法

[2] 雷公藤乙素对糖尿病肾病大鼠肾脏中转化生长因子β1的影响

[3] CN201710939867.7雷公藤乙素作为有毒蜂蜜的生物标志物的应用