Hce-8693的应用

背景^[1-3]

Hce-8693是一种细胞系，源自一位男性盲肠未分化腺癌患者的淋巴结转移的病理切片。这种细胞系在生物学研究中被广泛用于实验和科研，尤其在癌症研究领域。

Hce-8693细胞系的倍增时间是30.4小时，有丝分裂指数是28.8%。电子显微镜检查显示其具有巨核、核仁分界明显、微丝丰富以及分泌颗粒等特征。其染色体模式数是48，在软琼脂上能形成克隆的比率为8%。此外，Hce-8693细胞在细胞中和培养液上清中CEA阳性。当这种细胞被异体移植到裸鼠时，形成的瘤与患者原病灶相同，并且在细胞质中有阿尔新蓝阳性物质。

Hce-8693

Hce-8693细胞系培养操作

1)复苏Hce-8693细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)Hce-8693细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)Hce-8693细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

Hce-8693可以用于人参皂甙Rg3对大肠癌细胞株Hce-8693作用的实验研究

将人参皂甙Rg3分别单独、和联合肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL)基因作用于大肠癌细胞株Hce-8693，来探索传统中药与现代基因联合治疗对肿瘤治疗的新途径。方法将人参皂甙Rg3作用于大肠癌细胞株Hce-8693，并联合重组腺病毒载体介导的TRAIL基因(Ad／GT-TRAIL)协同作用。通过MTT比色法与流式细胞仪研究分析其对Hce-8693细胞的作用效果。

结果单独应用浓度0.01％、0.017％、0.025％、0.05％的人参皂甙Rg3及2000MOI的Ad／GT-TRAIL对Hce-8693细胞的生长抑制率分别为8.6％、8.6％、18.7％、21.9％和24.3％；凋亡诱导率分别为5.4％、7.6％、20.3％、20.9％和23.2％。联合应用后，对Hce-8693细胞株的生长抑制率及凋亡率均有显著的增强作用，分别达17.8％、25.7％、37.3％、46.2％及18.9％、20.1％、46.2％、56.0％。人参皂甙Rg3对Hce-8693的生长抑制及促凋亡作用存在浓度依赖现象。

结论一定浓度的人参皂贰Rg3或TRAIL能有效抑制Hce-8693的生长，人参皂贰Rg3对Hce-8693的生长抑制及促凋亡作用有浓度依赖性。联合应用后，其对Hce-8693的生长抑制作用及凋亡诱导作用均明显增强，协同作用的机理值得进一步探索。

参考文献

[1]Active oxygen species(1 O 2,O 2??)generation in the system of TiO 2 colloid sensitized by hypocrellin B[J].Shangjie Xu;;Jianquan Shen;;Shen Chen;;Manhua Zhang;;Tao Shen.Journal of Photochemistry&Photobiology,B:Biology,2002(1)

[2]Photodynamic therapy induced Fas-mediated apoptosis in human carcinomacells[J].Seyed Ali;;Soo Chee;;Gan Yuen;;Malini Olivo.International Journal of Molecular Medicine,2002(3)

[3]Hypocrellins and Hypericin induced apoptosis in human tumor cells:Apossible role of hydrogen peroxide[J].Seyed Ali;;Soo Chee;;Gan Yuen;;Malini Olivo.International Journal of Molecular Medicine,2002(5)

[4]Hypericin and hypocrellin induced apoptosis in human mucosal carcinoma cells[J].Seyed Mohamed Ali;;Soo Khee Chee;;Gan Yik Yuen;;Malini Olivo.Journal of Photochemistry&Photobiology,B:Biology,2001(1)

[5]吴彤.人参皂甙Rg3对大肠癌细胞株HCE8693作用的实验研究[D].浙江大学,2004.