酯化梭状芽孢杆菌PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

酯化梭状芽孢杆菌PCR试剂盒是一种用于检测酯化梭状芽孢杆菌的试剂盒，采用PCR技术进行检测。该试剂盒具有以下特点：

即开即用：用户只需要提供DNA模板，无需进行额外处理。

高特异性：引物经过精心优化，专一性强，只扩增酯化梭状芽孢杆菌，与其他微生物没有交叉反应。

阳性对照：提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

上样方便：PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

酯化梭状芽孢杆菌PCR试剂盒适合科研使用：本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。

需要注意的是，使用酯化梭状芽孢杆菌PCR试剂盒PCR反应液时需在冰中配置，以保持其稳定性。同时，为了确保检测结果的准确性，建议在多次重复实验后取平均值作为最终结果。

酯化梭状芽孢杆菌PCR试剂盒

酯化梭状芽孢杆菌PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据酯化梭状芽孢杆菌PCR试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在酯化梭状芽孢杆菌的感染。

应用^[4][5]

酯化梭状芽孢杆菌PCR试剂盒可以用于艰难梭状芽孢杆菌在喘息儿童粪便中的变化及免疫相关性的探讨

通过酯化梭状芽孢杆菌PCR试剂盒优化的实时荧光定量PCR技术，检测喘息儿童肠道粪便中艰难梭状芽胞杆菌的含量，同时采用ELISA方法，检测喘息儿童血清中IL-2及IL-4浓度，以探讨毛细支气管炎（简称毛支）与支气管哮喘发作期（简称哮喘发作）两种疾病与艰难梭状芽孢杆菌的相关性，并试图阐释毛支与哮喘发作患儿免疫机制的改变。

方法：实验组：所需粪便及血液样本来源于2013年10月-2014年10月，吉林大学白求恩第一医院小儿呼吸一科，住院毛支患儿及哮喘发作患儿。对照组：粪便样本及血液来源于相同时间，吉林大学白求恩第一医院儿外科无感染先天性畸形，如疝气、鞘膜积液等疾病患儿。实验组中毛支患儿66例，哮喘发作患儿20例；对照组患儿68例。应用试剂盒提取粪便样本中总DNA，选择艰难梭状芽胞杆菌特异性基因16S rRNA作为扩展区，设计该菌的特异性引物。在酯化梭状芽孢杆菌PCR试剂盒PCR扩增出目的片段的基础上，进行回收纯化，提高DNA回收量，测定模板浓度，用作标准品。应用SYBR GreenⅠ染料法，对待测样品中艰难梭状芽胞杆菌含量进行定量分析。使用GraphPad Prism5软件进行统计学分析。使用ELISA试剂盒，按照说明书的具体步骤对留取的实验组及对照组全部血清进行IL-2及IL-4检测，并使用curve expert1.4统计学分析，探讨艰难梭状芽孢杆菌在喘息儿童粪便中的变化及儿童毛支与哮喘发作期免疫机制的改变。

结果：1.酯化梭状芽孢杆菌PCR试剂盒实时荧光定量PCR技术可检测出人体肠道粪便中艰难梭状芽孢杆菌的含量，并且特异性强、重复性好、灵敏度高。2.毛细支气管炎患儿粪便中艰难梭状芽胞杆菌含量与对照组相比升高p＝0.0349，有统计学意义。3.支气管哮喘发作期患儿粪便中艰难梭状芽胞杆菌含量与正常对照组相比升高p＝0.044，有统计学意义。

参考文献

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[5]王宗润.艰难梭状芽孢杆菌在喘息儿童粪便中的变化及免疫相关性的探讨[D].吉林大学,2015.