NCI-H1876人小细胞肺癌贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

NCI-H1876人小细胞肺癌贴壁细胞系是一种常用的实验动物模型，用于研究小细胞肺癌的发生、发展和治疗。该细胞系来源于人类小细胞肺癌患者的肿瘤组织，具有高度的恶性程度和侵袭性，能够快速生长并形成肿瘤。

NCI-H1876人小细胞肺癌贴壁细胞系的主要特点是：

高度恶性：NCI-H1876人小细胞肺癌贴壁细胞系具有高度的恶性程度，能够在体外快速生长并形成肿瘤。

侵袭性：NCI-H1876人小细胞肺癌贴壁细胞系具有较强的侵袭性，能够穿过基底膜并进入周围组织。

易转移：NCI-H1876人小细胞肺癌贴壁细胞系容易发生转移，可以通过血液或淋巴系统扩散到其他部位。

可重复性好：NCI-H1876人小细胞肺癌贴壁细胞系的生长和转移过程可以重复多次，且结果稳定可靠。

NCI-H1876人小细胞肺癌贴壁细胞系广泛应用于肿瘤学研究中，包括肿瘤发生机制的研究、抗肿瘤药物的筛选和评价、肿瘤免疫治疗的研究等。

NCI-H1876人小细胞肺癌贴壁细胞系

NCI-H1876人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞培养操作

1)复苏NCI-H1876人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)NCI-H1876人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)NCI-H1876人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

NCI-H1876人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞可以用于N-乙酰氨基葡萄糖转移酶-V对小细胞肺癌细胞放射治疗敏感性的影响

利用shRNA构建低表达GnT-V的小细胞肺癌细胞株H1688/1079/sh、H1688/1564/sh、H146/1079/sh、NCI-H1876人小细胞肺癌贴壁细胞系以乃H146/1564/sh,同时我们首次利用MGAT5构建高表达GnT-V的小细胞肺癌细胞株H1688/mgat5和H146/mgat5。通过体外实验(CCK-8增殖实验、细胞划痕迁移实验、平板克隆实验)研究对比正常的H1688、H146细胞与干扰GnT-V后的H1688、H146细胞的放射敏感性之间的差异。

实验方法1、细胞的培养及转染人小细胞肺癌细胞株H1688、H146、NCI-H1876人小细胞肺癌贴壁细胞系培养置于37℃含5%CO2浓度的培养箱中,将细胞常规培养于含胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培养液中,H1688用10%FBS,H146用含15%FBS,每周传代2-3次。pGPU6/GFP/Neo GnT-V sh-RNA和GV230/EGFP/Neo MGAT5质粒载体从上海基因公司获得。待细胞培养至生长旺盛的对数生长期时,严格按照Invitrogen公司生产的Lipofectamine2000TM产品试剂盒说明书,用脂质体Lipofectamine2000TM将预先构建的质粒载体分别导入H1688及H146细胞中,同时分别用G418浓度为400μg/ml或者2000μg/ml来筛选阳性细胞克隆(有抗药性,同时具有相应质粒的表达功能)。分别统一命名为H1688组(H1688、H1688/NC/sh、H1688/1079/sh、H1688/1564/sh、H1688/NC/mgat5、H1688/mgat5),H146组(H146、H146/NC/sh、H146/1079/sh、H146/1564/sh、H146/NC/mgat5、H146/mgat5)，NCI-H1876人小细胞肺癌贴壁细胞系组。

参考文献

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[4]Small-cell lung cancer[J].Jan P van Meerbeeck;;Dean A Fennell;;Dirk KM De Ruysscher.The Lancet,2011(9804)

[5]陈文霞.N-乙酰氨基葡萄糖转移酶-V对小细胞肺癌细胞放射治疗敏感性的影响[D].南方医科大学,2015.