HCC1569 人乳腺癌细胞系的应用

背景^[1-3]

HCC1569人乳腺癌细胞系是一种常用的实验细胞系，用于研究乳腺癌的生物学特性和治疗机制。这种细胞系由人的乳腺癌细胞建立而来，具有维持乳腺癌细胞生长和分化的能力。

HCC1569人乳腺癌细胞系是一种来源于人乳腺癌组织的细胞系，具有以下特点：

形态特征：HCC1569人乳腺癌细胞系呈多边形或长条形，大小约为10-30微米不等。

生理功能：HCC1569人乳腺癌细胞系具有增殖、侵袭和转移等特性，可以用于研究乳腺癌的发生和发展机制。

分子特征：HCC1569人乳腺癌细胞系表达多种分子，包括雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和HER2等，这些分子与乳腺癌的治疗和预后密切相关。

HCC1569人乳腺癌细胞系在乳腺癌研究中具有广泛的应用价值。通过利用这种细胞系，研究人员可以深入研究乳腺癌的生物学特性，了解乳腺癌的发生、发展、转移和耐药机制，以及探索乳腺癌治疗的新药和新方法。例如，研究人员可以使用HCC1569人乳腺癌细胞系建立动物模型，模拟人类乳腺癌的发生和发展过程，从而更好地理解乳腺癌的发病机制和治疗方法。

此外，HCC1569人乳腺癌细胞系还可以用于评估和筛选对乳腺癌具有治疗作用的药物或化合物，以及测试和开发新的乳腺癌治疗方法。这种细胞系具有生长稳定、易于培养和操作简便等特点，为相关研究提供了可靠的实验模型。

HCC1569人乳腺癌细胞系

HCC1569人乳腺癌细胞系细胞培养操作

1)复苏HCC1569人乳腺癌细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)HCC1569人乳腺癌细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)HCC1569人乳腺癌细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

HCC1569人乳腺癌细胞系可以用于p110α亚基在HER2阳性PTEN缺失乳腺癌中作用的研究

通过转基因动物模型和人乳腺癌细胞系实验探讨p110α和p110β在HER2阳性PTEN缺失的乳腺癌中哪一个起主要作用，从而寻找高度靶向的分子治疗。

方法：建立特异性乳腺组织ErbB2阳性PTEN缺失的转基因动物模型，并分别敲除p110α和p110β，分析对肿瘤起始、肿瘤生长速度以及肺转移的影响。并将ErbB2阳性PTEN缺失的动物乳腺癌细胞原代培养，在体内和体外用特异性的p110α和p110β靶向抑制剂以及针对P110所有亚基的pan抑制剂处理，观察其对PI3K/AKT信号转导通路和肿瘤生长的影响。再建立ErbB2阳性或（和）PTEN缺失HMEC（人乳腺纤维细胞），观察两个基因对正常人乳腺纤维细胞体外转化和体内成瘤的能力的影响，并原代培养ErbB2阳性和PTEN缺失HMEC（人乳腺纤维细胞），在体内和体外用特异性的p110α和p110β以及对P110都针对的pan抑制剂处理，观察其对PI3K/AKT信号转导通路和肿瘤生长的影响。并用转染sh-PTEN的ErbB2阳性BT474细胞系以及ErbB2阳性PTEN缺失的HCC1569人乳腺癌细胞系和人乳腺癌细胞，进行上述实验。

培养人乳腺癌细胞系——转染sh-PTEN的ErbB2阳性BT474细胞系和SKBR3、ErbB2阳性PTEN缺失的HCC1569人乳腺癌细胞系以及NIC-PTENL/L乳腺癌细胞，使用拉帕替尼和p110α抑制剂处理，分析其联合使用后对PI3K/AKT信号转导通路和细胞增殖的影响。进一步将BT474-sh-PTEN以及HCC1569人乳腺癌细胞系分别原位移植到裸鼠乳腺组织，使用拉帕替尼和p110α抑制剂处理，分析其联合使用后对PI3K/AKT信号转导通路和肿瘤生长的影响。

结果:敲除p110α基因能够显著延缓ErbB2阳性PTEN缺失乳腺癌的发生，降低其生长速度以及极大减少肺转移的发生率，而敲除p110β与对照组相比基本没有差异。用特异性抑制剂作用于转基因动物来源的乳腺癌细胞也得出同样的结论。PTEN缺失后，能极大地增加ErbB2阳性的人乳腺癌纤维细胞的体外转化能力以及体内成瘤能力。ErbB2阳性和PTEN缺失HMEC（人乳腺纤维细胞）来源的肿瘤细胞，下调PTEN的ErbB2阳性BT474细胞系以及ErbB2阳性PTEN缺失的人HCC1569人乳腺癌细胞系以及人乳腺癌细胞，均依赖于p110α而不是p110β。结论：本实验提示PTEN缺失会增加ErbB2阳性乳腺癌细胞的侵袭性，而这种高侵袭性的乳腺癌亚型主要由p110α而不是p110β介导其生长以及PI3K/AKT活性，为临床使用高度特异性的分子靶向药物提供临床前证据。

参考文献

[1]ErbB receptors and signaling pathways in cancer[J].Nancy E Hynes;;Gwen MacDonald.Current Opinion in Cell Biology,2009(2)

[2]A Functional Genetic Approach Identifies the PI3K Pathway as a Major Determinant of Trastuzumab Resistance in Breast Cancer[J].Katrien Berns;;Hugo M.Horlings;;Bryan T.Hennessy;;Mandy Madiredjo;;E.Marielle Hijmans;;Karin Beelen;;Sabine C.Linn;;Ana Maria Gonzalez-Angulo;;Katherine Stemke-Hale;;Michael Hauptmann;;Roderick L.Beijersbergen;;Gordon B.Mills;;Marc J.van de Vijver;;RenéBernards.Cancer Cell,2007(4)

[3]Binding of Ras to Phosphoinositide 3-Kinase p110αIs Required for Ras-Driven Tumorigenesis in Mice[J].Surbhi Gupta;;Antoine R.Ramjaun;;Paula Haiko;;Yihua Wang;;Patricia H.Warne;;Barbara Nicke;;Emma Nye;;Gordon Stamp;;Kari Alitalo;;Julian Downward.Cell,2007(5)

[4]Targeting phosphoinositide 3-kinase—Moving towards therapy[J].Romina Marone;;Vladimir Cmiljanovic;;Bernd Giese;;Matthias P.Wymann.BBA-Proteins and Proteomics,2007(1)

[5]刘翩.p110α亚基在HER2阳性PTEN缺失乳腺癌中作用的研究[D].华中科技大学,2014.