EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞的应用

背景^[1-3]

EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞是一种人乳腺管癌细胞系。该细胞系在研究中常被用于了解乳腺管癌的发病机制、药物筛选和治疗效果评估等方面。

乳腺管癌是一种常见的恶性肿瘤，其发生和发展涉及到多种基因和环境的因素。通过研究EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞，科学家们可以深入了解乳腺管癌的生物学特性、细胞生长和增殖的机制，以及不同治疗方法的疗效和副作用。

为了保持细胞的活力和纯度，EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞需要在特定的培养条件下进行培养。这些条件包括适当的温度、湿度、pH值和营养物质等。同时，为了防止污染，需要在整个实验过程中采取严格的预防措施，如使用一次性耗材、定期更换培养液等。

EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞是一种重要的研究工具，有助于深入了解乳腺管癌的发病机制和治疗方法。但同时也需要严格的实验操作和管理，以保证实验结果的准确性和可靠性。

EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞

EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞培养操作

1)复苏EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞可以用于DNA启动子甲基化在脾酪氨酸激酶Syk肺癌表达中的影响

探讨人低转移肺大细胞癌(NL9980),人高转移肺大细胞癌(L9981),人肺腺癌(A549),人肺鳞癌(YTMLC-9),人肺小细胞癌(NCI-H446)5种肺癌细胞株中是否存在Syk基因启动子甲基化,探讨基因启动子甲基化对Syk的表达是否具有影响作用。

方法:体外培养人低转移肺大细胞癌细胞株(NL9980),人高转移肺大细胞癌细胞株(L9981),人肺腺癌细胞株(A549),人肺鳞癌细胞株(YTMLC-9),人肺小细胞癌细胞株(NCI-H446)5种肺癌细胞株以及Syk基因表达阳性对照EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞、Syk基因表达阴性对照人乳腺管癌细胞株(MDA-MB-435S);同时选取16例肺癌病人的肿瘤组织和相应的正常肺组织,提取其RNA,逆转录为cDNA,选取Syk基因特异性引物进行扩增,Real-time PCR观察其表达情况。甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测人低转移肺大细胞癌细胞株(NL9980),人高转移肺大细胞癌细胞株(L9981),人肺腺癌细胞株(A549),人肺鳞癌细胞株(YTMLC-9),人肺小细胞癌细胞株(NCI-H446)5种肺癌细胞株Syk基因启动子甲基化是否存在,以Syk基因启动子甲基化阳性的人乳腺管癌细胞株(MDA-MB-435S)、Syk基因启动子甲基化阴性的EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞为对照。以甲基化转移酶抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-CdR)处理后,检测处理前后Syk基因的表达变化。

结果:以Syk表达阳性对照EFM-19细胞系|人乳腺管癌细胞和阴性对照乳腺管癌细胞株(MDA-MB-435S)为参考,所培养的5种肺癌细胞株Syk基因表达缺失(P＜0.05)。16例肺癌病人肿瘤组织与相应的正常肺组织相比Syk基因表达明显减低,具有统计学差异(P＜0.05)。

参考文献

[1]Clinical significance of nuclear expression of spleen tyrosine kinase(Syk)in gastric cancer[J].Hiroshi Nakashima;;Shoji Natsugoe;;Sumiya Ishigami;;Hiroshi Okumura;;Masataka Matsumoto;;Shuichi Hokita;;Takashi Aikou.Cancer Letters,2005(1)

[2]Promoter hypermethylation and inactivation of O6-methylguanine-DNA methyltransferasein esophageal squamous cell carcinomas and its reactivation in cell lines[J].Ming Zhu Fang;;Zhe Jin;;Yimin Wang;;Jie Liao;;Guang-Yu Yang;;Li-Dong Wang;;Chung Yang.International Journal of Oncology,2005(3)

[3]Protein tyrosine kinase Syk modulates EGFR signalling in human mammary epithelial cells[J].Anja Ruschel;;Axel Ullrich.Cellular Signalling,2004(11)

[4]Role of epigenetic changes in hematological malignancies[J].Ulrich Lehmann;;Kai Brakensiek;;Hans Kreipe.Annals of Hematology,2004(3)

[5]董尚文.DNA启动子甲基化在脾酪氨酸激酶Syk肺癌表达中的影响[D].天津医科大学,2009.