真空负压抗原修复试剂盒的应用

背景^[1-3]

真空负压抗原修复试剂盒是一种用于免疫组化检测的试剂盒，主要用于增强抗原与抗体的结合力，提高检测灵敏度。该试剂盒采用真空负压技术，通过降低环境压力，使样本中的抗原更容易与抗体结合。

真空负压抗原修复试剂盒的主要组成成分包括：

缓冲液：用于调节pH值，保持样本的稳定性。

还原剂：如DTT（二硫苏糖醇），用于还原蛋白质上的二硫键，增加抗原表位的暴露。

酶抑制剂：如PMSF（苯甲基磺酰氟），用于抑制蛋白酶的活性，保护抗原不被降解。

真空负压设备：用于产生真空负压环境，促进抗原与抗体的结合。

在使用时，应按照说明书的指导进行操作，严格控制反应时间和温度等条件，以确保最佳的抗原修复效果。此外，该试剂盒应在储存条件为4℃的环境下保存，保质期为12个月。

真空负压抗原修复试剂盒

真空负压抗原修复试剂盒的使用方法如下：

将待检测的切片或细胞涂片放入含有缓冲液的容器中。

加入适量的还原剂和酶抑制剂，使样本充分混合。

将容器放入真空负压设备中，设置适当的时间和压力参数。

真空负压处理完成后，取出样本，进行后续的免疫组化检测。

真空负压抗原修复试剂盒的优点：

提高检测灵敏度：真空负压技术可以使抗原与抗体更紧密地结合，从而提高检测的灵敏度。

减少非特异性结合：真空负压处理可以减少非特异性结合，降低背景噪音。

保护抗原：酶抑制剂可以保护抗原不被降解，确保检测结果的准确性。

操作简便：真空负压设备可以自动控制压力和时间参数，操作简便，易于掌握。

应用^[4-5]

真空负压抗原修复试剂盒可以用于免疫组化反应过程优化及自动化实现

搭建新型免疫组化自动染色仪解决上述问题,保证自动染色仪免疫组化染色结果的可靠性。方法:对免疫组化染色脱蜡、真空负压抗原修复试剂盒修复、降温及抗原抗体结合等关键步骤进行改进,使免疫组化流程更适用于自动化仪器并提升染色效率。设计可进行高压修复的免疫组化反应器以及阵列式的加样系统。将优化后的染色流程以及设计的反应器及加样系统应用于新型免疫组化自动染色仪,并完成了新仪器的搭建和测试。

结果:对免疫组化染色关键过程的优化结果如下:1.脱蜡过程:用新型脱蜡液代替二甲苯,不影响HE染色和免疫组化染色结果。新型脱蜡液无毒且不易挥发,更适于在自动化仪器中使用。

2. 真空负压抗原修复试剂盒修复过程:对于一些抗体,如ki-67、ER等,不论是手工还是优化后的自动染色仪,EDTA或柠檬酸常压修复都难以达到柠檬酸高压修复的染色效果。而推荐柠檬酸高压修复的抗体占需要热修复的商品化一抗的69.5%。因此解决这一问题的最终途径是开发可以进行高压修复的免疫组化自动染色仪。

3. 降温过程:换液降温与手工外壁冲淋降温相比,ki-67免疫组化染色效果一致,降温时间缩短至10min,仅为传统仪器降温时间的1/3。换液降温过程易于自动控制,更用适于自动化免疫组化染色流程。

4. 抗原抗体结合过程:在振荡的条件下一抗孵育时间可由60min缩短至30min,且易于在自动化条件下实现。新型自动染色仪的搭建,除了应用上述优化结果,还进行了如下改进:1.设计了能耐0.1MPa压力、能进行120℃修复的反应器,实现了高压修复。2.设计了模块化的阵列式加样系统,解决了现有单一加样头存在的需要反复清洗、加样效率低的问题,同时避免了试剂间的交叉污染。经测试,所设计的自动化染色仪实现了高压修复,简化了加样过程,染色结果与手工一致且好于市售染色仪;用时仅为手工染色的63%,比市售仪器缩短21%,染色效率大大提高。

结论:本研究解决了现有染色仪在真空负压抗原修复试剂盒修复、降温、加样等方面存在的问题,提高了染色质量和效率,对推进免疫组化自动化和标准化具有重要意义。

参考文献

[1]p53 antibody:is it an indicator of dedifferentiated thyroid cancer?[J].Zekiye Hasbek;;Bülent Turgut;;Taner Erselcan.Annals of Nuclear Medicine,2014(1)

[2]Standardization of HER2 Immunohistochemistry in Breast Cancer by Automated Quantitative Analysis[J].Gustavson,Mark D;Bourke-Martin,Brian;Reilly,Dylan;Cregger,Melissa;Williams,Christine;Mayotte,Jane;Zerkowski,Maciej;Tedeschi,Greg;Pinard,Robert;Christiansen,Jason.Archives of Pathology&Laboratory Medicine,2009(9)

[3]Quantitative protein analysis from formalin‐fixed tissues:implications for translational clinical research and nanoscale molecular diagnosis[J]..J.Pathol.,2007(3)

[4]Heat-induced antigen retrieval:Mechanisms and application to histochemistry[J].Shuji Yamashita.Progress in Histochemistry and Cytochemistry,2006(3)

[5]钟乐.免疫组化反应过程优化及自动化实现[D].福州大学,2020.