大鼠肾周细胞的应用

背景^[1-3]

大鼠肾周细胞是一种特殊类型的细胞，主要位于大鼠的肾脏周围。这种细胞具有多种功能，包括维持肾脏的正常生理功能、调节水分和电解质的平衡以及参与肾脏的代谢过程等。

大鼠肾周细胞的作用：

维持肾脏的正常生理功能：大鼠肾周细胞可以分泌多种激素和生长因子，如肾素、血管紧张素等，这些激素和生长因子可以调节肾脏的功能，维持肾脏的正常生理状态。

调节水分和电解质的平衡：大鼠肾周细胞可以通过分泌抗利尿激素等激素来调节肾脏对水分和电解质的重吸收，从而维持体内水分和电解质的平衡。

参与肾脏的代谢过程：大鼠肾周细胞可以分泌多种酶和代谢物，参与肾脏的代谢过程，如尿素循环、尿酸合成等。

大鼠肾周细胞的形态特征

大鼠肾周细胞呈长梭形或不规则形，具有多个突起，胞质丰富。在光学显微镜下，大鼠肾周细胞的核呈圆形或椭圆形，染色较深，位于细胞的中央或偏位。在电子显微镜下，大鼠肾周细胞具有特殊的超微结构，如线粒体、内质网等。

大鼠肾周细胞

大鼠肾周细胞系培养操作

1)复苏大鼠肾周细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)大鼠肾周细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)大鼠肾周细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

大鼠肾周细胞可以用于UUO幼鼠肾间质纤维化中周细胞转分化趋势

通过观察单侧输尿管结扎（UUO）模型中大鼠肾周细胞标志物胶原Ⅰ型蛋白（coll1α1）、血小板源性生长因子受体β（PDGFRβ）、硫酸软骨素蛋白多糖2（NG2）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达水平的变化趋势，进而探讨周细胞转分化趋势，同时评价雷公藤多苷治疗后的干预效果。

方法：采用单侧输尿管结扎（UUO）模型，将5-6周龄90只雄性幼年SD大鼠，随机平均分为3组，即假手术组（行手术分离但不结扎左侧输尿管）、模型组（手术结扎左侧输尿管近肾盂段）和雷公藤治疗组。分别在术后1、2、3、7、14天每组各取6只小鼠处死，用免疫组织化学法检测周细胞标志物coll1α1、PDGFRβ、NG2、α-SMA在肾间质纤维化过程中的表达水平的变化，探讨大鼠肾周细胞在肾间质纤维化过程中的转分化趋势及作用，用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。

结果：（1）Masson染色：对照组蓝色表达主要位于肾小囊、毛细血管周围和肾小管基膜处，而小管间质中几乎无阳性染色；模型组内随着梗阻时间的延长，蓝色阳染面积逐渐增大，蓝色程度逐渐加深，与对照组相比各时间点均有显著性差异（P<0.01）；干预组各时间点肾脏肾间质病变程度较模型组为轻，但仍高于对照组（P<0.01）。

（2）免疫组织化学方法检测肾间质coll1α1、PDGFRβ、NG2、α-SMA表达水平的变化趋势：①对照组：coll1α1蛋白主要表达于血管旁纤维母细胞、肾小管周细胞、足细胞胞浆，而肾小球系膜细胞、肾小球上皮细胞、血管平滑肌细胞内无表达，各时间点无显著性差异（P>0.05）；PDGFRβ蛋白表达于各类型细胞胞浆，各时间点无显著性差异（P>0.05）；NG2蛋白着重表达于系膜细胞及血管平滑肌细胞胞浆，正常时肾小管周细胞无表达，各时间点无显著性差异（P>0.05）；α-SMA蛋白表达于血管平滑肌细胞胞浆，正常时肾小管周细胞无表达，各时间点无显著性差异（P>0.05）；②模型组：coll1α1、PDGFRβ、NG2、α-SMA蛋白随着试验时间的延长，表达强度逐渐增强，表达范围增宽，且逐渐向近髓处扩散，差异有统计学意义（P<0.01）；③模型干预组：coll1α1、PDGFRβ、NG2、α-SMA蛋白的表达各时间点明显低于模型组，但高于对照组，各时间点比较差异有统计学意义（P<0.01）。

结论：在UUO肾间质纤维化早期肾间质内coll1α1、PDGFRβ、NG2、α-SMA表达上调，提示UUO肾间质纤维化过程中大鼠肾周细胞可能发生了活化、迁移、转分化，阐明了周细胞在肾间质纤维化疾病演变中的作用，而雷公藤干预治疗后可能一定程度上抑制周细胞的活化及转分化，从而延缓肾间质纤维化的发展与演变。

参考文献

[1]Renal pericytes:multifunctional cells of the kidneys[J].Stefańska AM;;Péault B;;Mullins JJ.Pflügers Archiv-European Journal of Physiology,2013(6)

[2]The evolving role of renal pericytes[J].Claire M.Peppiatt-Wildman.Current Opinion in Nephrology and Hypertension,2013(1)

[3]Microvascular remodeling and wound healing:A role for pericytes[J].Brian M.Dulmovits;;Ira M.Herman.International Journal of Biochemistry and Cell Biology,2012(11)

[4]Novel insights into pericyte–myofibroblast transition and therapeutic targets in renal fibrosis[J].Fan-Chi Chang;;Yu-Hsiang Chou;;Yi-Ting Chen;;Shuei-Liong Lin.Journal of the Formosan Medical Association,2012(11)

[5]黄力.UUO幼鼠肾间质纤维化中周细胞转分化趋势[D].山西医科大学,2014.