PIG1 正常人皮肤黑色素细胞系的应用

背景^[1-3]

PIG1正常人皮肤黑色素细胞系是一种常用的实验细胞系，用于研究黑色素细胞（melanocytes）的生物学特性和功能。这种细胞系由正常人皮肤中的黑色素细胞建立而来，具有维持黑色素细胞生长和分化的能力。

PIG1正常人皮肤黑色素细胞系在科学研究中有广泛的应用，尤其是在黑色素细胞生物学、皮肤生物学、药物筛选和化妆品研发等领域。通过利用这种细胞系，研究人员可以深入研究黑色素细胞的生物学特性，了解黑色素的形成、代谢和调控机制，以及探索与黑色素细胞相关的疾病和治疗方法。

此外，PIG1正常人皮肤黑色素细胞系还可以用于评估和筛选对黑色素细胞具有影响作用的药物或化合物，以及测试和开发新的化妆品和护肤品。这种细胞系具有生长稳定、易于培养和操作简便等特点，为相关研究提供了可靠的实验模型。

需要注意的是，PIG1正常人皮肤黑色素细胞系是一种实验细胞系，其来源和使用需要遵循相关的伦理和法律规定。在使用这种细胞系进行实验时，应当确保遵守实验室安全规范，并采取适当的措施保护实验参与者和研究人员的安全。

PIG1正常人皮肤黑色素细胞系

PIG1正常人皮肤黑色素细胞系培养操作

1)复苏PIG1正常人皮肤黑色素细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)PIG1正常人皮肤黑色素细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)PIG1正常人皮肤黑色素细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

PIG1正常人皮肤黑色素细胞系可以用于探索了芍药苷对过氧化氢诱导的黑素细胞氧化损伤的作用及作用机制

研究方法:本研究的实验对象为永生化正常人黑素细胞系(PIG1正常人皮肤黑色素细胞系)及永生化白癜风黑素细胞系(PIG3V),芍药苷粉末配置方法为将25mg的芍药苷粉末溶于250μl的DMSO溶液中,配置成浓度为200μM的溶液,于-80℃深低温冰箱冻存,用254培养基稀释到需要浓度后进行后续实验。

使用MTS法测不同浓度芍药苷(50μM、100μM、200μM、400μM)对黑素细胞细胞增殖和细胞活性的作用。使用流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡情况,而氧化应激标志物活性氧水平也使用流式细胞术进行检测。

WST-8法测定超氧化物歧化酶(SOD)含量,过氧化氢酶(CAT)含量使用过氧化氢酶检测试剂盒测定。氧化应激相关基因mRNA表达情况筛选使用PCR array人氧化应激试剂盒进行,差异基因蛋白质表达水平使用Western Blot技术进行检测;细胞黑素小体含量及分布情况及细胞骨架结构F-actin使用免疫荧光染色法进行检测。骨架相关蛋白RhoA、ROCK1及Nrf2信号通路相关蛋白表达情况使用Western Blot技术进行检测。

同时使用siRNA进行基因敲除实验,使用sp600125试剂进行JNK基因抑制实验。数据分析及图表绘制使用GraphPad Prism 7.0版软件,使用单因素方差分析进行多组比较。数据表示为至少三个独立实验的均数±标准差。P值<0.05认为差异具有统计学意义。

本研究其余图片使用Photoshop 7.0软件进行拼接。

结果:PIG1正常人皮肤黑色素细胞系中芍药苷浓度为50μM及100μM时均促进细胞增殖,然而当药物浓度升高为200μM或400μM时细胞增殖受到抑制。PIG3V中药物浓度为50μM、100μM、200μM、400μM时均促进细胞增殖。最终选择芍药苷浓度50μM进行后续实验。MTS细胞活性检测结果表明芍药苷预处理24h不能改善H2O2处理后的细胞活性降低。然而芍药苷预处理48h可以明显改善氧化损伤细胞的细胞活性(P<0.05)。

总之,细胞增殖及细胞活性结果表明芍药苷浓度为50μM,预处理非24h时而是48h时可减少H2O2诱导的氧化损伤,增加细胞活性。H2O2 1.0mM给药处理24h后,PIG1正常人皮肤黑色素细胞系和PIG3V细胞出现明显的G2/M期细胞周期阻滞,PIG1正常人皮肤黑色素细胞系细胞G2/M期所占比例约从5%增加到27%,PIG3V细胞G2/M期所占比例约由16%增加到44%。芍药苷预处理24h后,PIG1正常人皮肤黑色素细胞系及PIG3V应激细胞的细胞周期G2/M期均增加(P<0.05),而48h时其没有增加,细胞周期结果表明,芍药苷调节应激细胞G2/M期的细胞周期过程。

参考文献

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