细胞色素氧化酶染色液(联苯胺法)的应用

背景^[1-3]

细胞色素氧化酶染色液(联苯胺法)是一种用于检测细胞色素氧化酶活性的染色方法。细胞色素氧化酶是一种重要的酶，参与细胞呼吸链中的电子传递过程，对细胞能量代谢起着关键作用。通过检测细胞色素氧化酶的活性，可以了解细胞的代谢状态和功能。

联苯胺法是一种常用的细胞色素氧化酶染色方法。该方法利用联苯胺作为底物，在细胞色素氧化酶的催化下，发生氧化反应并生成有色产物。通过观察有色产物的形成情况，可以判断细胞色素氧化酶的活性水平。

细胞色素氧化酶染色液（联苯胺法）通常包含联苯胺、缓冲液和其他辅助成分。在使用时，将染色液滴加到待检测的细胞样本上，经过一定时间的反应后，观察细胞样本的染色情况。根据染色的深浅和分布情况，可以判断细胞色素氧化酶的活性水平。

细胞色素氧化酶是线粒体中的一种重要酶类，它参与呼吸链中的电子传递过程，并产生细胞能量。在病理状态下，如心肌缺血、肝炎等疾病中，细胞色素氧化酶的活性会发生变化，因此检测其活性可以作为诊断和评估疾病进展的指标之一。

细胞色素氧化酶

细胞色素氧化酶染色液(联苯胺法)的制备方法如下：

准备试剂：将联苯胺溶于无水乙醇中，制成0.5%的溶液。另外，还需要准备柠檬酸缓冲液(pH 6.0)和亚硝基铁氰化钠溶液。

取适量的待检组织或细胞样本，加入适量的柠檬酸缓冲液(pH 6.0)，用匀浆器将组织或细胞充分打碎。

将匀浆液离心，去除上清液，留下沉淀物。

将沉淀物加入到含有联苯胺溶液的试管中，轻轻摇晃试管，使联苯胺充分与沉淀物接触。

加入适量的亚硝基铁氰化钠溶液，轻轻摇晃试管，使反应混合物充分混合。

在室温下静置反应10-15分钟，或者在37°C下反应30分钟。

用显微镜观察染色结果，并记录下染色情况。

应用^[4-5]

细胞色素氧化酶染色液（联苯胺法）可以用于低毒杀鼠烟剂筛选及植物提取物对达乌尔黄鼠细胞色素氧化酶活性的影响

对杀鼠烟剂进行动物实验,以小白鼠为实验对象;在植物实验中,采取了3种方法,第一是以月季花瓣为实验材料进行了退色实验,第二是以蚕豆幼苗为实验材料进行敏感植物实验;第三是以杨树为实验材料进行植物生理指标实验。在筛选杀鼠烟剂时,采用室内实验的方法,对其防火包装材料进行了筛选。在不同中药的乙醇粗提物对达乌尔黄鼠心脏细胞色素氧化酶活性影响的实验中,使用细胞色素氧化酶染色液（联苯胺法）筛选出对达乌尔黄鼠心脏细胞色素氧化酶活性影响较大中药提取物,为植物性杀鼠剂的筛选提供了一条新的思路。

研究结果如下:在杀鼠烟剂筛选方面,(1)通过筛选,最后筛选出CO杀鼠烟剂配方①和②、双层杀鼠烟剂配方②和③、和呋喃丹杀鼠烟剂配方①和②都是可取的杀鼠烟剂配方;氯化铵杀鼠烟剂应有选择性的使用;需要改进的配方是狼毒杀鼠烟剂配方①和②、双层杀鼠烟剂配方①和呋喃丹杀鼠烟剂配方③。

(2)在杀鼠烟剂防火包装材料筛选方面,筛选出14个配方,其中7个配方组成成分简单,容易配制,为优选配方;另外7种配方组成成分较多,配制不便,为候选配方。在中药粗提物对细胞色素氧化酶活性影响程度的筛选方面,对118种中药进行乙醇浸提,使用细胞色素氧化酶染色液（联苯胺法）测定这些中药的乙醇提取物对达乌尔黄鼠心脏细胞色素氧化酶活性的影响,结果表明,(1)将118种中药提取物对达乌尔黄鼠心脏细胞色素氧化酶活性的影响结果作方差分析,表明这118种中药提取物对达乌尔黄鼠细胞色素氧化酶活性影响的F值在4个浓度条件下都大于F0.05,存在显著的差异。

在1×10-3 kg.L-1浓度下有9种中药提取物对达乌尔黄鼠心脏细胞色素氧化酶活性有抑制作用,抑制率超过50%,这9种中药提取物有苏子、熟地黄、败酱草、三棱、白鲜皮、苏合香、葛根、决明子和女贞子;在1×10-2 kg.L-1浓度下有3种中药提取物对达乌尔黄鼠心脏细胞色素氧化酶活性有抑制作用,抑制率超过50%,这3种中药提取物为败酱草、三棱和葛根。

(3)将118种中药提取物对达乌尔黄鼠心脏细胞色素氧化酶活性的细胞色素氧化酶染色液（联苯胺法）结果进行聚类分析,把118种中药提取物分为10个类群,其中类群1有43种中药提取物,类群2有12种中药提取物,类群3有34种中药提取物,类群4有17种中药提取物,类群5有7种中药提取物,类群6至类群10各有1种中药提取物。

参考文献

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[4]Free radicals-mediated damage in transmitochondrial cells harboring the T14487C mutation in the ND6 gene of mtDNA[J].Ricardo Gonzalo;;Elena Garcia-Arumi;;David Llige;;Ramon Marti;;Abelardo Solano;;Julio Montoya;;Joaquín Arenas;;Antonio L.Andreu.FEBS Letters,2005(30)

[5]梁伟坡.低毒杀鼠烟剂筛选及植物提取物对达乌尔黄鼠细胞色素氧化酶活性的影响[D].河北农业大学,2006.