MRMT-1 大鼠乳腺癌细胞系的应用

背景^[1-3]

MRMT-1大鼠乳腺癌细胞系是一种来源于雌性大鼠的乳腺癌细胞系。它是一种常用的实验材料，被广泛用于研究肿瘤生物学、药物筛选和治疗策略等领域。

MRMT-1大鼠乳腺癌细胞系具有以下特点：

高度增殖：MRMT-1大鼠乳腺癌细胞系具有快速增殖的能力，可以在体外培养条件下快速生长。

多药耐药性：MRMT-1大鼠乳腺癌细胞系对多种化疗药物表现出耐药性，这使得它成为研究肿瘤耐药机制的重要模型。

可移植性：MRMT-1大鼠乳腺癌细胞系可以通过移植到小鼠体内来研究肿瘤的生长和转移情况。

MRMT-1大鼠乳腺癌细胞系

MRMT-1大鼠乳腺癌细胞系细胞培养操作:

1)复苏MRMT-1大鼠乳腺癌细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)MRMT-1大鼠乳腺癌细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)MRMT-1大鼠乳腺癌细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

MRMT-1大鼠乳腺癌细胞系可以用于EphrinB2/EphB2信号通路通过调节脊髓突触蛋白和炎症信号参与骨癌痛的机制研究

乳腺癌极易发生骨转移,癌细胞侵袭引起骨组织破坏和周围神经损伤,从而导致中枢敏化,引发剧烈疼痛。研究表明,Ephrin及其Eph受体在突触可塑性及突触信号传递中发挥重要作用,Ephrin/Eph信号异常调控多种类型疼痛的产生和维持密切相关。

本研究分别从脊髓中枢敏化的神经机制和炎症机制阐述了EphrinB2/EphB2信号通路在骨癌疼痛中的作用并探究EphrinB2/EphB2作为癌痛治疗靶点的可能性。

方法:通过将MRMT-1大鼠乳腺癌细胞系注入SD大鼠胫骨骨髓腔的方法建立癌症诱导骨痛(CIBP)模型;采用检测动物痛觉行为学、分析骨组织影像学和形态学评估模型建立是否成功。CIBP模型建立成功后,通过鞘内注射EphB2-Fc阻断EphrinB2/EphB2信号,进而分析CIBP动物痛觉行为学的变化情况,确定EphB2-Fc的镇痛效果;收集脊髓组织,透射电镜观察CIBP大鼠脊髓突触形态变化情况;HE染色和尼氏染色分析CIBP大鼠脊髓炎症细胞浸润水平及神经元蛋白质合成情况;运用蛋白质组学、免疫荧光和免疫印迹等技术分析CIBP大鼠脊髓突触相关蛋白及脊髓炎症信号相关蛋白的表达变化并进一步确定EphB2-Fc对上述蛋白表达的调节作用。

结果:第一部分:(1)成功构建MRMT-1大鼠乳腺癌细胞系CIBP大鼠模型:CIBP大鼠表现出机械痛觉敏感性增加、胫骨骨组织损伤(X射线)、骨小梁缺失(HE染色);(2)CIBP大鼠突触结构与神经元功能改变:透射电镜观察表明突触前活化区致密度增加、尼氏染色显示神经元蛋白质合成能力下降;(3)CIBP大鼠EphrinB2/EphB2信号增强:脊髓组织中EphrinB2、磷酸化EphB2和总EphB2表达增加;(4)CIBP大鼠脊髓突触蛋白表达异常调控:突触前膜和突触囊泡相关蛋白表达上调、突触后兴奋性受体表达上调、突触后抑制性受体表达下调、钙信号及线粒体分裂相关蛋白表达上调;(5)Eph B-Fc通过抑制EphrinB2/EphB2信号缓解骨癌痛:鞘内注射EphB2-Fc减少CIBP大鼠机械痛觉敏感性、下调脊髓EphrinB2/EphB2信号、恢复突触相关蛋白表达调控。

参考文献

[1]Luteolin relieves lung cancer-induced bone pain by inhibiting NLRP3 inflammasomes and glial activation in the spinal dorsal horn in mice[J].Zhou Yong-Sheng;Cui Yue;Zheng Jia-Xin;Quan Ya-Qi;Wu Sheng-Xi;Xu Hui;Han Yong.Phytomedicine,2022

[2]Mechanisms of Peripheral and Central Pain Sensitization:Focus on Ocular Pain[J].Puja Giulia;Sonkodi Balazs;Bardoni Rita.Frontiers in Pharmacology,2021

[3]Role of Microglia and Astrocytes in Spinal Cord Injury Induced Neuropathic Pain[J].Miranpuri Gurwattan S.;Bali Parul;Nguyen Justyn;Kim Jason J;Modgil Shweta;Mehra Priya;Buttar Seah;Brown Greta;Yutuc Noemi;Singh Harpreet;Wood Aleksandar;Singh Jagtar;Anand Akshay.Annals of Neurosciences,2021

[4]Astrocyte‐induced synapse formation and ischemic stroke[J].Yamagata Kazuo.Journal of Neuroscience Research,2021

[5]张凤.EphrinB2/EphB2信号通路通过调节脊髓突触蛋白和炎症信号参与骨癌痛的机制研究[D].湖北科技学院,2023.