荧光染料Cy5.5与其抗体标记方法

Cy5.5是一个简称，是荧光染料的一种，英文的全称是Cyanine5.5，Cyanine是花菁的意思，所以也可以叫它花菁染料5.5，是最常见的红色荧光团中的一种。

参考抗体标记方法

1.将Cy5.5 NHS 1.0 mg 溶解于400 μL DMSO后，加入到1mL 的玻璃瓶中盛有(D-ser2)-leucine-enkephalin acetate (YSGFLT, 0.75 mg) 的400 μL DMSO溶液。（Dye 和peptide 投料比是 1:1）

2.然后加入15 μL三乙胺，常温避光搅拌反应混合物过夜。

3.用HPLC 纯化蛋白，使用蛋白C18柱子(25 cm×10 mm)，每次上样注入2×400 μL，30分钟梯度洗脱从0.1% TFA水溶液到MeCN∶H2O（0.1% TFA）=70∶30，流速4mL /min。（对不同的蛋白选择不同的合适HPLC梯度流动相）

4.收集适当的色带峰，标记多肽的保留时间比未标记的多肽长。

5.产品冷冻干燥成粉末或在水溶液中，-20℃避光储存；必要时可用质谱表征。

6.CyDye标记的蛋白稳定性取决于蛋白本身。例如标记的IgG在4 ℃可避光保存2月；更长期的保存需加入等体积的甘油-20 ℃避光保存。

其它花菁荧光染料

花菁染料有很多，比如常用的有Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7等。Cy5.5中的第一个5表示的是假吲哚基团之间有5个碳原子数，Cy3中的3表示假吲哚基团之间有3个碳原子数。添加后缀“.5”表示苯并融合的花青。它们都可以用来标记生物分子，用于荧光成像和其他基于荧光的生化分析。Cy5.5和Cy7的吸收在近红外区，已广泛用于活体成像领域来代替放射性元素。它们广泛用于标记肽，蛋白质和寡核苷酸等。