胰阔圆盘吸虫PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

胰阔圆盘吸虫PCR试剂盒是一种用于检测胰阔圆盘吸虫的分子生物学试剂盒。胰阔圆盘吸虫是一种寄生虫，可以感染人类和动物的胰腺，引起胰腺炎等疾病。

胰阔圆盘吸虫PCR试剂盒包含以下主要成分：

PCR反应液：包括DNA聚合酶、dNTPs、引物等。

模板DNA提取液：用于提取样本中的DNA。

阳性对照品：含有胰阔圆盘吸虫特异性基因序列的DNA片段。

阴性对照品：不含有胰阔圆盘吸虫特异性基因序列的DNA片段。

胰阔圆盘吸虫PCR试剂盒

胰阔圆盘吸虫PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在胰阔圆盘吸虫的感染。

胰阔圆盘吸虫PCR试剂盒的优点是灵敏度高、特异性强，可以快速准确地检测出胰阔圆盘吸虫的存在。同时，该试剂盒操作简单，不需要复杂的设备和技术，适用于各种实验室条件。

应用^[4-5]

胰阔圆盘吸虫PCR试剂盒可以用于胰阔盘吸虫分子种系发生的研究

胰阔盘吸虫(Eurytrema pancreaticum)主要寄生于牛、羊等反刍动物的胰脏、胰管内，破坏动物的胰腺或阻塞胰管，引起胰阔盘吸虫病。动物感染后会出现消瘦、贫血、水肿及消化功能障碍，导致生产性能下降，严重感染者会引起死亡。胰阔盘吸虫病呈全球分布，对反刍动物危害严重，给畜牧业生产造成较大的经济损失。另外，胰阔盘吸虫还可寄生于人，是一种重要的人兽共患病病原。目前对胰阔盘吸虫的研究主要集中在虫体形态结构、发育过程及胰阔盘吸虫病的流行病学、诊断和综合防治等传统寄生虫学方面；在胰阔圆盘吸虫PCR试剂盒分子水平上仅对核糖体18S和小RNA进行了研究，对核糖体全序列和线粒体全基因组的研究还未见报道。因此，本研究针对这一空白展开研究。

首先，利用胰阔圆盘吸虫PCR试剂盒分子生物学方法，获得5条胰阔盘吸虫的核糖体全序列，对5个核糖体全序列的大小、基因组成、碱基组成等进行分析，并基于18S核糖体序列构建系统发生树，分析胰阔盘吸虫与其他吸虫间的进化关系。其次，扩增胰阔盘吸虫的线粒体全基因组，对全基因组进行序列分析，构建系统发生树，探讨胰阔盘吸虫在吸虫中的系统发生位置。

胰阔圆盘吸虫PCR试剂盒结果表明：扩增获得的5个核糖体全序列长度为83068310bp，包括18S，ITS1，5.8S，ITS2，28S和IGS。5条虫体18S、ITS1、5.8S、ITS2、28S的长度均无变化，分别为1996bp、1103bp、160bp、231bp和3669bp，IGS长度只有四个碱基的变化，为11471151bp。比较发现6段核糖体序列的种内差异分别为0.10.4%、00.5%、0%、0%、00.2%和2.920.2%。以18S核糖体序列为标记基因，采用MP、ML和BI三种方法构建系统发生树的结果相似，胰阔盘吸虫位于斜睾目的进化分支上，与传统形态学分类一致，说明18S核糖体序列是研究寄生虫分子种系发生的良好基因标记。所获得的线粒体全基因组由12个蛋白质编码基因、2个rRNA基因、22个tRNA基因和2个非编码区组成，线粒体全基因组大小为15169bp，编码蛋白质基因、rRNA基因和非编码区序列长分别为10121bp，1746bp和1281bp。整个线粒体基因组核苷酸组成为：A=17.96%，C=11.13%，G=26.21%，T=44.52%，A+T占62.48%，基因组碱基组成明显偏好碱基A和T。

参考文献

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