派琴虫通用PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

派琴虫通用PCR试剂盒是一种用于检测派琴虫的生物试剂，采用PCR技术进行检测。

派琴虫通用PCR试剂盒具有高灵敏度、特异性强、操作简便等特点，可用于科研实验、临床检测等领域。通过该试剂盒，用户可以快速、准确地检测派琴虫，对于派琴虫病的诊断和治疗具有重要意义。

派琴虫通用PCR试剂盒是一种用于检测派琴虫DNA的PCR试剂盒。该试剂盒通常包括以下成分：

PCR反应液：包括PCR缓冲液、dNTPs、引物、Taq聚合酶等。

标准品：用于定量检测派琴虫DNA的浓度。

阴性对照：用于排除假阳性结果的可能性。

阳性对照：用于确认试剂盒的准确性和可靠性。

派琴虫通用PCR试剂盒时，首先需要提取样本中的DNA，然后将提取的DNA加入到PCR反应液中进行扩增。通过检测扩增产物的荧光信号强度，可以确定样本中是否存在派琴虫DNA。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，适用于临床诊断和流行病学调查等领域。

派琴虫通用PCR试剂盒

派琴虫通用PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在派琴虫的感染。

应用^[4-5]

派琴虫通用PCR试剂盒可以用于贝类派琴虫原位杂交检测技术研究

派琴虫病(Perkinsosis)是严重危害全球贝类养殖业的主要疫病,也是进出口贝类产品贸易中的重要检疫性疫病,目前,世界动物卫生组织(OIE)将雷氏液体巯基醋酸盐培养基(RFTM)培养法作为派琴虫(Perkinsus)检测的金标准,但其不能区分腰鞭毛虫(Dinflagellate);另外,鉴于我国口岸检疫现阶段普遍采用的派琴虫通用PCR试剂盒PCR检测方法存在假阳性率过高的缺陷;本研究通过采用随机引物标记法,制备派琴虫特异性核酸探针,首次建立了派琴虫原位杂交(ISH)检测方法。

探针标记效率检测表明,所制备派琴虫核酸探针含量达到100ng/μL;Southern bolt检验证实探针特异性强,与贝类包拉米虫(Bonamia)、单孢子虫(Haplosporidium)等无交叉反应,为派琴虫属通用探针;以OIE推荐的雷氏液体巯基醋酸盐培养基培养法及派琴虫通用PCR试剂盒作为标准方法,对实验室采集的20份贝类样品进行派琴虫感染检测表明,本研究所建立派琴虫原位杂交检测方法的诊断敏感性为90.9%,诊断特异性为100%。

利用所建立的原位杂交方法,对实验室采集的蛤仔和牡蛎进行检测的结果显示,我国黄海海域的菲律宾蛤仔和文蛤均有派琴虫感染,而牡蛎样品没有检出。贝类派琴虫原位杂交检测方法的成功建立,既满足了我国口岸进出境贝类派琴虫检疫需求,也为我国贝类养殖场派琴虫流行病学调查提供了技术支持。

参考文献

[1]Isolation and identification of Perkinsus olseni from feces and marine sediment using immunological and molecular techniques[J].Kyung-Il Park;;Hyun-Sung Yang;;Hyun-Sil Kang;;Moonjae Cho;;Kwang-Jae Park;;Kwang-Sik Choi.Journal of Invertebrate Pathology,2010(3)

[2]Identification of Marteilia refringens infecting the razor clam Solen marginatus by PCR and in situ hybridization[J].Inmaculada López-Flores;;Manuel A.Garrido-Ramos;;Roberto de la Herran;;Carmelo Ruiz-Rejón;;Manuel Ruiz-Rejón;;JoséI.Navas.Molecular and Cellular Probes,2008(3)

[3]Description of Perkinsus beihaiensis n.sp.,a new Perkinsus sp.Parasite in Oysters of Southern China[J].JESSICA A.MOSS;JIEXIAO;CHRISTOPHER F.DUNGAN;KIMBERLY S.REECE.Journal of Eukaryotic Microbiology,2008(2)

[4]Prevalence of Perkinsus marinus(Dermo),Haplosporidium nelsoni(MSX),and QPX in Bivalves of Delaware's Inland Bays and Quantitative,High‐Throughput Diagnosis of Dermo by QPCR[J].PAUL N.ULRICH;JOHN W.EWART;ADAM G.MARSH.Journal of Eukaryotic Microbiology,2007(6)

[5]王宗祥.贝类派琴虫原位杂交检测技术研究[D].内蒙古农业大学,2011.