人甲状腺乳头状癌细胞的应用

背景^[1-3]

人甲状腺乳头状癌细胞是一种常见的甲状腺癌细胞类型，其恶性程度较低，生长缓慢，预后较好。在甲状腺癌中，乳头状癌是最常见的一种类型，约占所有甲状腺癌的60%左右。这种癌症在年轻女性中较为常见，通常在40岁前发病。

人甲状腺乳头状癌细胞具有一些独特的生物学特性。首先，它们通常表现为无痛性结节，质地较硬，活动度较差。其次，乳头状癌细胞容易发生颈部淋巴结转移，但通常不会发生远处转移。此外，人甲状腺乳头状癌细胞对放射治疗和内分泌治疗具有一定的敏感性，这有助于提高患者的生存率。

人甲状腺乳头状癌细胞是一种来源于人甲状腺乳头状癌的细胞系。这种细胞系是通过将甲状腺乳头状癌组织接种到裸鼠体内，然后从裸鼠体内分离出肿瘤细胞并进行体外培养而建立的。

人甲状腺乳头状癌细胞具有以下特点：

贴壁生长：人甲状腺乳头状癌细胞在体外培养时，需要贴附在培养皿的底部，形成单层细胞。

多角形形态：人甲状腺乳头状癌细胞呈多角形形态，具有较大的胞体和多个短小的突起。

高增殖率：人甲状腺乳头状癌细胞具有较高的增殖率，可以在短时间内达到较高的细胞密度。

表达特异性蛋白：人甲状腺乳头状癌细胞表达特异性的甲状腺乳头状癌相关蛋白，如Thyroglobulin、Pax8等。

人甲状腺乳头状癌细胞在甲状腺癌研究中具有广泛的应用，如用于研究甲状腺癌的发生、发展、转移机制，以及药物筛选、基因表达分析等。同时，由于其来源于人甲状腺乳头状癌，因此在研究过程中可以更好地模拟甲状腺癌的生理环境，提高研究的准确性和可靠性。

人甲状腺乳头状癌细胞

人甲状腺乳头状癌细胞培养操作

1)复苏人甲状腺乳头状癌细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)人甲状腺乳头状癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)人甲状腺乳头状癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

人甲状腺乳头状癌细胞可以用于夏枯草通过调控MicroRNA-146对甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭的影响

研究通过离体培养BRAFV600E基因突变型甲状腺乳头状癌细胞即B-CPAP细胞,通过多种生物分子学技术检测B-CPAP细胞较正常甲状腺细胞中micro RNA-146b-3p表达水平的变化,中药夏枯草作用于B-CPAP细胞对其micro RNA-146b-3p表达水平的影响,以及通过影响micro RNA-146b-3p的表达水平对B-CPAP细胞增殖、侵袭、迁移等生物学特性的改变,为甲状腺乳头状癌寻找新的诊疗靶点,亦从分子水平为中药夏枯草用于甲状腺乳头状癌的临床治疗提供理论依据。

夏枯草对BRAFV600E基因突变型甲状腺乳头状癌细胞micro RNA-146b-3p的影响:

1.细胞培养:将BRAFV600E基因突变型甲状腺乳头状癌细胞B-CPAP细胞、人甲状腺正常细胞Nthy-ori 3-1细胞、人脐静脉内皮细胞EA细胞分别按其相应的适宜条件培养。

2. 检测中药夏枯草的药物安全性:将不同浓度夏枯草作用于EA细胞,通过CCK-8实验检测夏枯草的安全性。

3. 检测顺铂作用于B-CPAP细胞的最适浓度:人甲状腺乳头状癌细胞B-CPAP细胞中分别加入各个浓度的顺铂溶液,通过CCK-8实验检测其对B-CPAP细胞的最适作用浓度。

4. qRT-PCR法检测人甲状腺乳头状癌细胞B-CPAP细胞相对Nthy-ori 3-1细胞micro RNA-146b-3p表达水平的变化以及夏枯草作用于人甲状腺乳头状癌细胞B-CPAP细胞对其micro RNA-146b-3p表达水平的影响。

夏枯草通过调控micro RNA-146b-3p对BRAFV600E基因突变型甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响1.CCK-8实验检测夏枯草通过抑制micro RNA-146b-3p表达对人甲状腺乳头状癌细胞B-CPAP细胞增殖能力的影响。

2. Transwell实验检测夏枯草通过抑制micro RNA-146b-3p表达对人甲状腺乳头状癌细胞B-CPAP细胞侵袭能力的影响。

3.细胞划痕实验检测夏枯草通过抑制micro RNA-146b-3p表达对人甲状腺乳头状癌细胞B-CPAP细胞迁移能力的影响。

参考文献

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