酶标仪的分类及常见应用

酶标仪（微孔板读板机）是一种常见的实验仪器，主要用于测量微孔板孔内的化学反应、生物反应及相关特性。

传统酶标仪是指具备吸收光检测功能的酶联免疫检测仪，随着光学技术的发展和试剂类型的不断丰富，如今酶标仪所具备的检测功能日益丰富，在光吸收检测(Abs)基础上增加了荧光强度(FI)、发光检测(Lum)、荧光偏振(FP)、时间分辨荧光(TRF)、Western-Blot检测、均相时间分辨荧光(HTRF)，AlphaScreen/AlphaLISA等多种检测技术，每一种技术都具有独特的应用价值。

一、酶标仪分类

1.基于滤光方式不同可分为：滤光片式酶标仪、光栅式酶标仪。

2.按功能划分可分为：光吸收酶标仪、化学发光酶标仪、荧光酶标仪、多功能酶标仪。

①光吸收酶标仪：是用来进行可见光与紫外光吸光度的检测，特定波长的光通过微孔板中的样品后，光能量被吸收，而被吸收的光能量与样品的浓度呈一定的比例关系，由此可以用来定性和定量的检测，光吸收的检测技术成熟，成本低，操作简单，但是动态范围窄，灵敏度比较低，特异性不强，一般可见光和紫外光分别采用钨灯及氘灯作为光源，而紫外/可见酶标仪是可以将两种光源进行切换，适应不同测量波长的需求。

②荧光酶标仪：是用来进行荧光的检测，通过激发光栅分光后的特定波长的光照射到被荧光物质标定的样品上后,会发出波长更长的发射光，通过发射光栅后到达检测器，荧光的强度与样品的浓度呈一定的比例，荧光检测灵敏度高，可实时检测，使用方便，检测模式多样，但是容易受外界干扰，激发光与发射光容易互相影响，干扰检测。

③化学发光酶标仪：是来自生物化学反应中的自发光，可分为辉光型和闪光型两种类型，辉光型发光持久，稳定，能持续一段时间；闪光型发光时间短,变化快，稳定性不强，需要应用自动加样器才可以进行，化学发光中发出的光子数与样品量呈一定比例关系，化学发光酶标仪灵敏度非常高,动力学范围广。

④多功能酶标仪：以上三种酶标仪的集合，它集成了两种或者三种酶标仪于一体，可以同时进行光吸收，荧光和化学发光的检测，功能强大，使用范围广，可作为研究平台，避免了重复购买，是实验室的首选，另外根据通道的个数，可以将酶标仪分为单通道和多通道两种类型，单通道又有自动和手动两种之分。

二、酶标仪常见应用

光吸收常见应用

1.DNA/RNA含量测定常用于快速检测质粒DNA浓度。

2.ELISA（酶联免疫吸附试验）检测方法多（间接法、竞争法、双抗夹心法等）。

3.细胞活力检测MTT\XTT等酶活动力学检测。

※光吸收法优缺点

1.优点：灵敏、特异性、简单、快速、对环境没污染、稳定易于自动化操作等。

2.不足：降低灵敏度（针对新方法其易受到杂质干扰）、动态范围比较窄（3数量级），步骤繁琐（清洗步骤多）。

化学发光检测

1.单/双荧光素酶报告基因、BRET。

2.细胞活力检测、细胞增殖检测、支原体检测、细胞毒性检测、ATP、dsDNA、水母发光蛋白Ca2+。

3.基于化学发光的ELISA检测等。

荧光检测

1.生物大分子（DNA/RNA或蛋白质）。

2.免疫荧光（荧光标记物，如GFP\YFP\CFP等）。

3.细胞学分析（细胞增殖、细胞毒理、细胞迁移、细胞吸附、细胞渗透）。

4.线粒体膜电位分析。

5.钙流检测。