犬流感病毒H3N2型PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

犬流感病毒H3N2型PCR试剂盒是一种专门用于检测犬流感病毒H3N2型的PCR技术试剂盒。这种试剂盒具有以下特点：

即开即用：用户只需要提供DNA模板，无需进行任何预处理。

特异性高：引物和探针经过优化，具有高特异性，仅针对犬流感病毒H3N2型，不会与其他病原发生交叉反应。

灵敏度高：该试剂盒可以在少量样本中检测到犬流感病毒H3N2型，灵敏度高达可以检测到100%的阳性样本。

操作简便：PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳，大大简化了操作步骤。

犬流感病毒H3N2型PCR试剂盒中包含阳性对照：方便用户区分假阴性样品，提高检测准确性。

犬流感病毒H3N2型PCR试剂盒中包含足够进行40μL体系的PCR反应的试剂，可以满足大量样本的检测需求。

犬流感病毒H3N2型PCR试剂盒是一种用于检测犬流感病毒H3N2型的分子生物学工具。该试剂盒通常包含用于扩增和检测H3N2型病毒RNA的引物和探针，以及用于提取和纯化样本中病毒RNA的试剂。

犬流感病毒H3N2型PCR试剂盒

使用犬流感病毒H3N2型PCR试剂盒进行检测通常包括以下步骤：

1.样本采集：从犬只的鼻腔、喉咙或粪便等样本中采集一定量的病毒RNA。

2.RNA提取：将采集到的样本中的病毒RNA进行提取，以获得纯净的病毒RNA样本。

3.反转录：将提取到的病毒RNA进行反转录，生成相应的cDNA。

4.PCR扩增：将反转录得到的cDNA与试剂盒中的引物和探针混合，进行PCR扩增。PCR反应会扩增出H3N2型病毒的特异性DNA序列，并在特定条件下产生可见的荧光信号。

5.结果分析：根据PCR反应产生的荧光信号，判断是否存在H3N2型病毒感染。阳性结果表示H3N2型病毒感染存在，阴性结果则表示未检测到该病毒。

应用^[4-5]

犬流感病毒H3N2型PCR试剂盒可以用于犬常见病毒多重PCR检测方法的建立及H3N2亚型犬流感病毒的分离与进化分析

建立了犬流感病毒H3N2型PCR试剂盒多重PCR(Multiplex PCR,m PCR)方法,设计、优化两组引物分别用于检测CRV和CEV。其中,CRV包括:犬腺病毒2型(Canine Adenovirus Type 2,CAV2),犬瘟热病毒(Canine Distemper Virus,CDV),H3N2亚型犬流感病毒(H3N2 Subtype Canine Influenza Virus,CIV H3N2)和犬副流感病毒(Canine Parainfluenza Virus,CPIV);CEV包括:CAV2,犬圆环病毒(Canine Circovirus,Canine CV),犬冠状病毒(Canine Coronavirus,CCo V)和犬细小病毒(Canine Parvovirus,CPV)。

建立的CRV及CEV的犬流感病毒H3N2型PCR试剂盒m PCR检测方法敏感性试验表明,两种m PCR方法的共同检测限均为1×104病毒拷贝,特异性、敏感性好。在不同的PCR仪及时间点进行检测,重现性好。

使用本研究建立的犬流感病毒H3N2型PCR试剂盒m PCR方法进行临床样本初步测试,从患有呼吸道疾病或肠道疾病的犬中分别收集了20支鼻腔拭子和20支肛门拭子样本进行评估,结果发现80%(16/20)犬鼻腔拭子样本呈病毒阳性,CDV是本次研究CRV中最常见的病原体;85%(17/20)的犬肛门拭子样本呈病毒阳性,CPV是CEV中最常见的病原体,且存在多种病毒混合感染犬的情况。

建立的犬流感病毒H3N2型PCR试剂盒m PCR方法可以快速评估CRV感染或CEV感染的状态,为犬常见病毒的快速检测提供了有效的工具。CRV中,CIV H3N2是十几年来出现的威胁犬只健康的病原体。该病毒容易变异,且存在跨物种传播的风险。为了监测CIV H3N2在广东省的遗传变异情况,2018年间,从广州市、东莞市,佛山市的动物医院或救助站,对具有呼吸道疾病症状的犬采集鼻腔拭子,进行m PCR检测,16.27%(7/43)的样本显示CIV核酸阳性。

向CIV H3N2阳性拭子样本中加入4‰体积的TPCK-胰酶后再接种9日龄鸡胚,优化CIV H3N2的分离条件,48 h即可得到高滴度的病毒液,最终共分离7株CIV H3N2,病毒分离成功率得到提高。

参考文献

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