标准蛋白质溶液(BSA,5MG/ML)的应用

背景^[1-3]

标准蛋白质溶液(BSA,5MG/ML)是一种常用的生物试剂，常用于生物学和生物化学实验中作为标准品来校准实验结果。

标准蛋白质溶液(BSA,5MG/ML)是一种浓度为5mg/mL的牛血清白蛋白(BSA)溶液。它通常用于生物化学实验中作为标准参照物，用于测定其他物质的浓度或活性。

标准蛋白质溶液的制备方法包括将牛血清白蛋白纯化后溶解在去离子水中，并用分光光度计或其他分析仪器进行定量。然后将一定量的BSA溶液稀释至所需浓度，即可得到标准蛋白质溶液。

由于BSA是一种常见的蛋白质，且其分子量和结构已知，因此它被广泛用作标准参照物。此外，BSA还具有稳定性好、不易变性等优点，适用于长时间保存和使用。

标准蛋白质溶液(BSA,5MG/ML)

制作标准蛋白质溶液的步骤如下：

1.称取50mg的牛血清白蛋白（BSA），加入到10ml的去离子水中。

2.加入1ml的0.05M NaOH溶液调pH至碱性。

3.用去离子水定容至10ml，混匀后即可得到5mg/ml的BSA溶液。

可以根据需要将其稀释到更低的浓度。需要注意的是，BSA溶液应当在无菌条件下进行配制，并且应当储存于-20℃环境下以保持其稳定性。此外，不同的实验需要使用不同浓度的BSA溶液，因此应当根据具体实验的要求来配制相应浓度的BSA溶液。

应用^[4-5]

标准蛋白质溶液(BSA,5MG/ML)可以用于以卟啉为探针毛细管电泳分析蛋白质方法的研究

利用毛细管电泳定量微量蛋白质的角度出发,主要研究了利用水溶性卟啉——meso-四(4-磺基苯)卟啉(TPPS4)作为光谱探针,在毛细管电泳上定量微量蛋白质的方法,并探讨了两种卟啉作为蛋白质标记物应用于毛细管电泳免疫分析的可能性。

本文研究了meso-四(4-磺基苯)卟啉染色测定蛋白质的复合反应,讨论了蛋白质浓度与TPPS4溶液在435nm处光谱吸收值的线性关系。考察了反应温度及时间、缓冲溶液酸度、TPPS4浓度对定量关系的影响,并探讨了非蛋白物质的干扰和采用不同蛋白作标准工作曲线时各种蛋白质的响应。优化了光谱分析中用TPPS4作为探针定量微量蛋白的条件。在光谱分析的基础上,研究了毛细管电泳技术定量微量蛋白质的方法。

考察了复合物形成后改变溶液酸度对复合物稳定性的影响,优化毛细管电泳分析TPPS4的条件,并引入(-环糊精作为电泳缓冲添加剂进一步优化TPPS4的电泳行为。

最后以标准蛋白质溶液(BSA,5MG/ML)作为标准蛋白质,建立标准曲线,对人血清中蛋白质总量进行测定。本论文所建立的毛细管电泳定量分析蛋白质的方法,在未使用荧光检测器或增加毛细管光程的情况下,比毛细管电泳蛋白质直接进样、紫外检测的灵敏度提高了2个数量级。与毛细管电泳测定微量蛋白的常用方法——荧光衍生后利用激光诱导荧光检测相比,方法操作简单,试剂稳定并降低了仪器的成本。

最后考察了TPPS4和氯化血红素(hemin)作为标记物应用于免疫分析和毛细管电泳免疫分析的可行性。讨论了TPPS4和hemin与蛋白质的结合方法和游离标记物的去除,测定了TPPS4-BSA结合率和TPPS4与标准蛋白质溶液(BSA,5MG/ML)结合后对蛋白免疫活性的影响。

讨论中发现,所研究的卟啉类高灵敏度染色剂与抗原蛋白结合后,在毛细管电泳可见光检测的分析并不比非标记蛋白在毛细管电泳紫外检测分析中更为灵敏。实验结果为进一步探讨两种卟啉化合物作为荧光标记物的可能性打下了基础。

参考文献

[1]Recent advances in enantiomer separations by affinity capillary electrophoresis using proteins and peptides.Yoshihide Tanaka;;Shigeru Terabe.Journal of Biochemical and Biophysical Methods,2001

[2]Quantitative affinity chromatography.Donald J.Winzor.Journal of Biochemical and Biophysical Methods,2001

[3]A simple and sensitive colorimetric assay of zinc in serum using cationic porphyrin.Tetsuo Makino.Clinica Chimica Acta,1999

[4]Fluorescence immunoassay ofα-1-fetoprotein with hemin as a mimetic enzyme labelling reagent.Qing-Zhi Zhu;;Feng-Hua Liu;;J.-G.Xu;;Wen-Jin Su;;Jian-Wei Huang.Fresenius'Journal of Analytical Chemistry,1998

[5]李昕.以卟啉为探针毛细管电泳分析蛋白质方法的研究[D].北京化工大学,2005.