酶法提取二苯乙烯苷

发布日期:2023/10/16 15:26:51

背景技术

二苯乙烯苷又称芪多酚，属于多羟基芪类化合物，二苯乙烯苷是何首乌药材中特有的生物活性成分，易溶于水、甲醇、乙醇。药理研究表明，二苯乙烯苷具有抗氧化清除自由基、抗衰老、降低胆固醇、保肝及神经保护作用，可开发研制治疗老年性痴呆、降血脂和抗动脉粥样硬化的新药物。

二苯乙烯苷

现有从何首乌中分离制备二苯乙烯苷的方法：首先采用稀乙醇为提取溶剂对何首乌药材进行回流提取，然后使用乙酸乙酯对提取液进行萃取，再对乙酸乙酯萃取层依次进行硅胶柱层析和SephadexLH-20柱层析分离，最后制备得到含量为85%的二苯乙烯苷。该方法的主要缺点在于：①采用高温回流提取二苯乙烯苷，在高温条件下二苯乙烯苷易被氧化和糖苷键断裂，该提取方法对二苯乙烯苷造成破坏；②采用常压柱色谱多次分离，过程繁琐、耗时长，溶剂耗量大，提高了制备成本；③组分在常压柱子中停留时间过长而产生死吸附，样本损失大，回收率较低。

除此以外，目前人工合成的二苯乙烯苷极具困难，且成本昂贵，合成出的二苯乙烯苷性能不够稳定，且纯度不高，目前从植物中提取二苯乙烯苷是一种常见的方法，但是大部分从植物中提取还都采用了大量的有机溶剂进行提取，不仅操作繁琐，价格昂贵，且制得的二苯乙烯苷的纯度依旧不高，且存在有机物残留的问题。因此，制得一种高纯度，无有机溶剂的二苯乙烯苷是很有必要的事情。

制备方法

称取1.5kg何首乌洗净后晾干放入气流粉碎机中，以3m³/min空气耗量和0.75MPa空气压力进行粉碎，将得到何首乌粉末按固液比为1:2倒入蒸馏水中，以250r/min转速搅拌混合15min，得到何首乌粉末悬浊液；然后将上述得到的何首乌粉末悬浊液移入高压均质机，以2.5L/h流速和105MPa压力进行高压均质处理7min，量取1.1L均质后的何首乌混合液装入体积为2L的陶瓷酶解罐中，加入酶解底物总质量0.35%复合酶剂，用浓度为0.5mol/L醋酸溶液调节pH至4.5，于40℃下密封酶解70min。

酶解完成后过滤分离去除滤渣，将得到的酶解液装入管式超滤装置中，利用10万分子量的醋酸纤维素膜作为超滤膜，并在0.15MPa的驱动压力和25℃的条件下进行超滤，收集滤液；接下来将上述超滤后的滤液和无水乙醇按体积比为1:1进行混合，放入微波提取仪中，以230W功率加热至45℃，保温微波醇提1.5h，醇提完成后在50℃下旋蒸回收无水乙醇并浓缩处理直至混合液体积变为原体积的7/48，得到浓缩液。

最后将上述得到的浓缩液放入真空冻干机，以1℃/min速率进行降温直至冷阱温度达到-35℃，冷冻干燥35min，干燥后再放入玛瑙研钵中研磨成粉并过200目标准筛，得二苯乙烯苷。