胃膜素的应用和制备方法

发布日期:2020/1/17 8:12:58

背景及概述^[1-2]

黏蛋白是一类主要由黏多糖组成的高分子量糖蛋白，属于成分、结构均比较复杂的结合蛋白质，主要分布于消化道、呼吸道、泌尿生殖道等机体管腔内表面，特别是胃肠道中。胃肠道中的黏蛋白种类很多，从胃黏液中分离出来的黏蛋白相对分子质量高达2 × 106 D。研究证实，黏蛋白对上皮细胞起重要的保护和润滑作用，黏蛋白还能参与上皮细胞的分化、更新，调节细胞黏附、参与细胞信号转导，甚至与肿瘤的发生发展及演进、愈后的关系密切，在各种生理、病理过程中均发挥重要作用。因此，黏蛋白的研究及应用越来越受到人们的重视胃膜素，取义胃粘膜再生素。自猪胃粘膜提取的胃膜素，为白色至黄白色粉末或黄褐色颗粒，有蛋白胨臭味，稍有咸味，着水涨为黏浆，呈微溶状态，水溶液呈灰色或乳白色，遇弱酸即沉淀，遇热不凝固，在溶液中能被60%以上乙醇或丙酮沉淀。与酸较长时间作用，能分解成各种蛋白质和多糖组分，其多糖组分含葡萄糖醛酸、甘露糖、乙酰氨基葡萄糖和乙酰氨基半乳糖，氨基己糖的总量为5～8%，PI3.3～5。

我国猪胃原料极为丰富，但从猪胃粘膜中提取胃膜素的工艺相对落后，国内主要按胃粘膜消化、三氯甲烷或乙醚脱脂、丙酮沉淀、干燥的工艺路线生产，该工艺耗时长、胃膜素得率低，仅1.5%左右；国外采取pH6.5的NaH3PO4、EDTA、NEM及盐酸胍的缓冲液为提取液，再经高速离心、透析、等密度梯度离心制得胃膜素，该工艺复杂、生产成本高、生产周期长；采用乙醇提取法，提高胃膜素的收率，生产成本低，通过严格控制提取乙醇浓度、加工时间和温度来提高产品质量。

应用 ^[1-3]

胃膜素是猪胃粘黏膜消化提取制得的一种粘蛋白，有抗胃蛋白酶分解和弱抗酸作用，能在胃内形成膜，覆盖溃疡面，减少胃酸的刺激，有利于溃疡面的愈合，还可减少患者的痛苦。胃膜素能够激活胃粘膜细胞的再生DNA复制链，使胃粘膜快速生成新生组织，此外还有抗胃蛋白酶分解和弱抗酸作用，在胃内形成膜，覆盖溃疡面，减少胃酸的刺激，有利于溃疡面的愈合；临床上用于治疗胃、十二指肠溃疡和胃酸过多症。

制备^[1-3]

方法1：一种从猪胃粘膜中提取胃膜素的方法，该方法包括如下步骤：

（1）消化：取绞碎胃膜浆，投入耐酸的夹层锅中，每100kg胃膜在搅拌下加入1800ml的盐酸，pH为3到3.5之间，保温40～50℃2～3小时消化至呈半透明的浆液时停止。过滤，除去杂质，以50%氢氧化钠溶液调节pH4～5，得消化液。

（2）乙醇沉淀：上述消化液在不断搅拌下加入80％以上的乙醇，控制乙醇含量在65～70%之间，在0～5℃静置10～18小时，收集沉淀，压干。按湿重加2～3倍60～70%乙醇，充分混合均匀，洗涤1～2次，沉淀压干至可搓碎，在65～75℃温度下干燥，得粗制胃膜素。

（3）脱脂、干燥、粉碎：将得到的粗制胃膜素研磨至颗粒状，移入脱脂器中，脱脂完全后充分挥发去乙醚后在50±2℃下烘干。测试含水量应在3%以下，粉碎过80目筛即胃膜素。

方法2：一种胃膜素和胃蛋白酶的联合提取方法，包括以下步骤：

（1）以料液比为1：1.55~1.65的比例，向猪胃黏膜中加入体积分数为4%~6%的盐酸溶液，再加入50%~60%猪胃黏膜重量的苯甲酸钠，40~45℃浸泡1~2h，过滤，收集滤液；

（2）向滤液中加入碱性脂肪酶，于32~35℃，pH值为9.0~9.2的条件下酶解0.5~1.5h，继续加入中性脂肪酶，于32~35℃，pH值为7.0的条件下酶解0.5~1.5h，再将其浓缩为原滤液体积的1/3~1/2，冷却至0~5℃；其中，碱性脂肪酶和中性脂肪酶与滤液的重量体积比均为0.02 ~0.05：1；

（3）调节上述浓缩液pH值为3.0~6.0，再缓慢加入等体积的0~5℃ 的丙酮，并在添加过程中迅速搅拌，静置16~20h，过滤，分别收集胃膜素粗品和上清液，向胃膜素粗品中加入0~5 ℃的95%乙醇，洗涤2~3次，分离胃膜素和洗涤液，于70~80℃真空干燥胃膜素，得胃膜素精品；

方法3：取捣碎的胃黏膜浆50 g 于烧杯中，用2 mol /L 盐酸调pH 至3.0 ～ 3.5，加入少量氯仿。用保鲜膜密封烧杯口，于45 ℃水浴中消化4 h，双层纱布过滤，除去未消化杂质。用氢氧化钠溶液调节消化液pH 至4.0 ～ 5.0，在搅拌下加入无水乙醇，使其含量为70%，放入4 ℃冰箱中静置12 h。取出、过滤，收集沉淀并尽量压干，按所得沉淀重量的2 倍加入70%乙醇，充分混匀、洗涤2次，压干沉淀，在70 ℃干燥箱中烘干，得到胃膜素粗品。再用乙醚脱脂，于50 ℃干燥箱中烘干，研碎，即得胃膜素成品。其简要流程如图。