3%氯化钠碱性蛋白胨水的应用

背景^[1-3]

3%氯化钠碱性蛋白胨水用于嗜盐性细菌特别是副溶血性弧菌及弧菌的前增菌培养。3%氯化钠碱性蛋白胨水检验原理：蛋白胨提供碳源、氮源、维生素、生长因子；高含量氯化钠和高pH值可以抑制非弧菌类细菌生长，不影响副溶血性弧菌生长。

3%氯化钠碱性蛋白胨水

3%氯化钠碱性蛋白胨水实验方法:

1.培养基阳性组:取稀释后的各试验菌悬液1ml分别加于预先制备的试管培养基中,每种细菌接种两支试管。同时分别取1ml菌悬液加于无菌空平皿中,用于计数,每种细菌做两个平板。

2.培养基阴性组:即空白对照,即不添加菌液。

3.接种量计数:步骤1中的平皿中,细菌倾注胰酪大豆胨琼脂培养基,霉菌和白色念珠菌倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基。同时每种培养基做1个空白。

4.培养条件:

无菌检查:20~25℃培养14天或直至出现浑浊(不超过14天)

MPN计数:30~35℃培养箱中培养3天

控制菌检查:30~35℃培养箱中培养18~24小时

倾注计数用的的胰酪大豆胨琼脂培养基平板置30~35℃培养箱中培养3天

倾注计数用的沙氏葡萄糖琼脂培养基平板置20~25℃培养箱中培养3~5天

应用^[4][5]

3%氯化钠碱性蛋白胨水可以用于3种致病性弧菌选择性鉴别培养基的研制

研究和建立致病性弧菌快速检测的新技术和新方法受到各国研究机构的重视。用选择性鉴别培养基即可满足抽检率,更真实的反应水产品的污染状况,又能克服标准方法的费时、繁琐和成本较高等许多不足。

主要围绕以下几个方面开展了一些工作：1霍利斯弧菌选择性鉴别培养基的研制基于霍利斯弧菌的基础营养和特殊生态环境需求,优化了其增菌培养基及培养条件。通过单因素试验结合响应面组合试验得到如下结果：培养基组成成分为混合蛋白胨2.11%(胰蛋白胨：鱼蛋白胨为1：1)、酵母浸膏0.210%、NaCl2.13%、pH7.5；培养温度为36土1℃。经过8h增菌后,该培养基的菌液浓度是GB/T4789.7-2008中规定方法的碱性蛋白胨水(APW)增菌菌液浓度的1.39倍,增菌效果明显。

以霍利斯弧菌特有的酶系统及其代谢特点和对某些特定抑菌成分的抵抗力为基础,设计研制了霍利斯弧菌选择性鉴别培养基(VhDM)。试验中对VhDM的显色效果、平板效率、灵敏度和特异性进行评价。

结果显示：VhDM对霍利斯弧菌具有较好的选择性和特异性；用VhDM在36±1℃培养16h-24h,霍利斯弧菌菌落为黄色；其它各种弧菌及非弧菌属致病菌菌落呈红色或未形成有效的可见菌落；VhDM对霍利斯弧菌的出菌效率与嗜盐琼脂相比为(90.65±1.72)%；检出限为101cfu/mL:因此,VhDM对海产品中霍利斯弧菌分离鉴别与检测是可行的,且具有操作简便、经济、结果易于观察等优点。

2河弧菌选择性鉴别培养基的研制基于河弧菌的基础营养和特殊生态环境需求,优化了其增菌培养基及培养条件。通过单因素试验结合响应面组合试验得到如下结果：培养基组成成分为混合蛋白胨2.24%(胰蛋白胨：鱼蛋白胨为1：3)、酵母浸膏0.204%、NaCl1.81pH8.0；培养温度为36±1℃。经过8h增菌后,该培养基的菌液浓度是GB/T4789.7-2008中规定方法的碱性蛋白胨水(APW)增菌菌液浓度的1.59倍,增菌效果明显。以河弧菌特有的酶系统及其代谢特点和对某些特定抑菌成分的抵抗力为基础,设计研制了河弧菌选择性鉴别培养基(VfDM)。试验中对VfDM的显色效果、平板效率、灵敏度和特异性进行评价。

结果显示：VfDM对河弧菌具有较好的选择性和特异性；用VfDM在36±1℃培养18h-24h,河弧菌菌落为深褐色；其它各种弧菌及非弧菌属致病菌菌落呈红色或未形成有效的可见菌落；VfDM对河弧菌的出菌效率与嗜盐琼脂相比为(92.80±2.88)%；检出限为101cfu/mL;因此,VfDM对海产品中河弧菌分离鉴别与检测是可行的,且具有操作简便、经济、结果易于观察等优点。

参考文献

[1]Rapid detection of Vibrio metschnikovii in aquatic products by real-time PCR.J.Cao;;J.Xu;;Q.Zheng;;P.Yan.Folia Microbiologica,2010

[2]Simultaneous differential detection of human pathogenic and nonpathogenic Vibrio species using a multiplex PCR based on gyrB and pntA genes.C.S.J.Teh;K.H.Chua;K.L.Thong.Journal of Applied Microbiology,2010

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[4]Comparative evaluation of different chromogenic/fluorogenic media for detecting Escherichia coli O157:H7 in food.Mammad Manafi;;Birgit Kremsmaier.International Journal of Food Microbiology,2001

[5]陈洁.3种致病性弧菌选择性鉴别培养基的研制[D].浙江工商大学,2012.