人肺腺癌细胞的应用

背景^[1-3]

人肺腺癌细胞源自一位男性肺腺癌患者。人肺腺癌细胞SPC-A-1细胞是一株常用的肺癌细胞系，也被用于肺癌发病机理和抗肿瘤药物的体外研究试验研究；人肺腺癌细胞SPC-A-1细胞具有典型的上皮细胞状形态结构。

人肺腺癌细胞

人肺腺癌细胞培养操作:

1）复苏人肺腺癌细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）人肺腺癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）人肺腺癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类；

1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

人肺腺癌细胞可以用于蛇葡萄素钠体内、外协同卡铂抗SPC-A-1人肺腺癌细胞的作用及其机理研究

研究蛇葡萄素钠(AMP-Na)单用及与卡铂(CBP)合用在体内、外对SPC-A-1人肺腺癌细胞的抗肿瘤作用及作用机制。

方法:建立人肺腺癌SPC-A-1细胞裸鼠皮下移植瘤模型,评价AMP-Na单用及与CBP合用对荷瘤裸鼠在体的抑瘤作用;采用MTT比色法测定AMP-Na单用及与CBP合用对SPC-A-1细胞的体外细胞毒活性;用流式细胞仪分析AMP-Na单用及与卡铂联用后对SPC-A-1细胞调亡、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响。

结果:1.体内实验表明,AMP-Na 125～260mg/kg各剂量单用对人肺腺癌SPC-A-1细胞裸鼠皮下移植瘤生长无明显影响。与CBP合用,可显著增加CBP对SPC-A-1细胞裸鼠移植瘤的抗肿瘤活性,具有协同抑制作用,以AMP-Na 200mg/kgⅠ和260mg/kg作用最强,与溶媒对照比,差别有极显著性(P＜0.01);与卡铂单用比,差别有显著性(P＜0.05)。

2. 体外细胞毒实验结果表明,AMP-Na 6.25～200μg/ml对人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖的抑制作用具有明显的量效关系,与CBP联用后有协同效应,可显著增加CBP对SPC-A-1细胞的抑制作用,卡铂单用的IC50为35.69μg/ml±6.56μg/ml,联用后依次降为33.98±6.3、30.96±3.8、28.34±6.3、19.13±6.9和＜6.25μg/ml。

3. FCM分析显示,AMP-Na 12.5～100μg/ml各剂量单用对人肺腺癌SPC-A-1细胞具有明显的诱导凋亡作用,与阴性对照比,差别有显著性(P＜0.05);和CBP联用后凋亡率较卡铂单用明显上升,有协同抑制作用。

4. FCM分析显示,AMP-Na单用及与CBP联合作用后可显著提高SPC-A-1细胞Bcl-2与Bax的平均荧光强度,降低Bcl-2/Bax的比率,增加Caspase-3的表达。

结论:1.AMP-Na单用对人肺腺癌SPC-A-1细胞裸鼠皮下移植瘤生长无明显影响;AMP-Na与卡铂合用,可以增强卡铂对裸鼠移植瘤的抗肿瘤活性,有协同抑制作用。

2. AMP-Na单用能够显著抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞的增殖,且有浓度依赖性;AMP-Na与卡铂合用可以增强卡铂的活性,协同抑制SPC-A-1细胞的增殖。

3.AMP-Na可能是通过激活细胞内的Caspase-3介导的信号转导通路,降低凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的比率,诱导凋亡而发挥其抗肿瘤作用。

参考文献

[1]Improving the solubility of ampelopsin by solid dispersions and inclusion complexes.Li-Ping Ruan;;Bo-Yang Yu;;Guang-Miao Fu;;Dan-ni Zhu.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2005

[2]Ganciclovir prodrug therapy is effective in a murine xenotransplant model of human lung cancer.Roland Kurdow;;Arnd S.Boehle;;Sieglinde Haye;;Lars Boenicke;;Bodo Schniewind;;Peter Dohrmann;;Holger Kalthoff.The Annals of Thoracic Surgery,2002

[3]Momordin I,a compound of ampelopsis radix,inhibits AP-1 activation induced by phorbol ester.Seyeon Park;;Dug Keun Lee;;Yun Ha Whang;;Chul Hak Yang.Cancer Letters,2000

[4]Potentiation of antimetabolite antitumor activity in vivo by dipyridamole and amphotericin B.Shou-song Cao;;Yong-su Zhen.Cancer Chemotherapy and Pharmacology,1989

[5]徐明丽.蛇葡萄素钠体内、外协同卡铂抗SPC-A-1人肺腺癌细胞的作用及其机理研究[D].兰州大学,2008.