带你了解2,2'-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐

概述

2,2'-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐是一种化学物质，主要用作过氧化物酶底物，化学式是C₁₈H₂₄N₆O₆S₄，分子量是548.68，可用ABTS缩写表示。纯净的化合物呈现浅绿色至绿色，亮黄绿至深黄绿色的粉末状态。

用途

1.常用于游离氯的光谱试剂，酶联免疫吸附试验的显色底物，过氧化物酶的底物，用于ELISA 实验，该底物产生一种可溶性的显绿色的螯合物，可使用405 nm光谱读取OD值，可使用1%SDS终止反应[1-2]。

2.用作抗氧化剂[3-5]。2 ,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐，如果与过二硫酸钾反应，可以生成绿色的ABTS自由基。该自由基在734nm有吸收，所以，通过检测734nm的吸光度，可以测定的其浓度。一个物质加入到ABTS自由基溶液后，如果734nm的吸光度降低，则说明该物质具有自由基清除活性，属于抗氧化剂。该法称为ABTS自由基清除法，可以用评价植物（或中草药抽提物）、纯化合物的抗氧化能力的。此外，可以作为对血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液或各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力进行检测的试剂盒。不过，ABTS自由基的生成需要过二硫酸钾氧化，所以，是一个混合物。而且，反应通常需要12小时，比较耗时。

储存条件

密封、2-8℃保存。运输过程中需要冰袋运输。

酶活性实验

研究了使用ABTS作为HRP缀合物底物的酶联免疫吸附测定（ELISA）的微技术。在4个底物的比较研究中，即; 5-氨基水杨酸（5AS），邻苯二胺（OPD），O-联甲苯胺（OT）和ABTS，对于HRP的敏感性，ABTS是最敏感，最稳定，最具视觉效果的蓝绿色[ 6]。 ABTS是典型的过氧化物酶底物。为了纯化和表征，过氧化物酶阳性转化体在培养上清液中产生活性蛋白的条件下大规模培养（XL）。培养160小时后，获得相对于底物ABTS的55,000U / L的活性，并收获含有过氧化物酶的上清液。以ABTS为底物，当H₂O₂浓度超过0.125mM时，过氧化物酶活性显着下降，表明该酶被H₂O₂抑制。反应速率取决于测试的底物，其值在31.2和125μM之间[7]。

使用温度控制的多模板读数器或者在UV / Vis分光光度计中光度测定酶活性。通过添加酶引发反应。在25℃，在适当的基质波长下，在10分钟内测量酶活性。一个单位（1U）定义为每分钟转化1μmol底物的酶量。各种H₂O₂浓度（0-1250μM，酶浓度（0.27-54 nM）和底物浓度）用于测定酶活性。在pH3.8的100mM乙酸钠缓冲液和最终H₂O₂浓度下测定rPsaDyP对ABTS的活性。在420nm（ε42036,000Lmol-1 cm-1）下研究ABTS阳离子自由基的产生[7]。

参考文献

[1]周莉娜,毛晖,曲东.全氟辛酸和雌二醇对黄孢原毛平革菌过氧化物酶活性的影响[J].农业环境科学学报, 2013, 032(006):1134-1142.

[2]张坤.基于生物矿化的酶@MnO₂纳米复合酶的合成及其活性研究[D].新乡医学院[2023-07-03].

[3]王智荣,崔春,林宗毅,等.海带多糖及其纯化组分的胆酸盐吸附能力及抗氧化活性[J].食品科学, 2016, 37(1):6.

[4]龙远春张欣万国栋邓泽元张兵.不同产地决明子蒽醌化合物组成及其抗氧化活性测定[J].食品科学, 2017, 038(016):145-151.

[5]吕海鹏,张悦,陈兴华,等.不同花色种类白茶的抗氧化活性及其主要品质化学成分分析[J].食品科学, 2016, 37(20):9.

[6]Matsuda H, et al. Evaluation of ELISA with ABTS, 2-2'-azino-di-(3-ethylbenzthiazoline sulfonic acid), as the substrate of peroxidase and its application to the diagnosis of schistosomiasis. Jpn J Exp Med. 1984 Jun;54(3):131-8.

[7]Lauber C, et al. Identification, heterologous expression and characterization of a dye-decolorizing peroxidase of Pleurotus sapidus. AMB Express. 2017 Aug 23;7(1):164.