蛋白标记技术服务

背景^[1-5]

蛋白标记技术服务是生物公司针对客户的特定需求，帮助客户选择最适合的标记物或标记方式并优化标记方法最后为客户提供个性化解决方案，以满足客户特定需求的技术性服务。

1.蛋白标签：与目的蛋白融合表达，以便于目的蛋白表达、检测、示踪和纯化的蛋白或多肽。这些标签抗体可以高特异地结合对应的标签融合多肽或蛋白，籍以分离纯化和分析检测目的蛋白。

2.SNAP标签：SNAP标签是可在各种表达载体中商购的自标记蛋白标签。SNAP-标签是182残基多肽（19.4kDa），其可以与任何目的蛋白质融合，并且进一步特异性地并且用合适的配体（例如荧光染料）共价标记。自推出以来，SNAP-tag已经在生物化学和研究活细胞中蛋白质和酶的功能和定位方面发现了许多应用。

3.HA标签蛋白：标签序列YPYDVPDYA，源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇，9个氨基酸，对外源靶蛋白的空间结构影响小,容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端。易于被Anti－HA抗体检测和ELISA检测。

4.MYC标签蛋白：MYC标签蛋白是一个含11个氨基酸的小标签，标签序列Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu，这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。Myc tag已成功应用Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中,可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。

5.FLAG：Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。

6.GST：谷胱甘肽巯基转移酶在解毒过程中起到重要作用，它的天然大小为26KD。由于GST高度可溶，可增加外源蛋白的可溶性，另外GST融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达，可提高表达量。GST标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶(Glutathione sepharose)亲和树脂进行纯化。而且，GST标签蛋白可在温和、非变性条件下洗脱，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。但GST在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力，因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂如：盐酸胍或尿素等。

7.H6：His-Tag(HHHHHH)，有6个组氨酸的标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。由于H6分子量小，不会影响目标蛋白的功能，且可以在变性或非离子型表面活性剂存在的条件下纯化，无空间位阻效应，常用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究。

服务种类^[6][7][8]

1.放射性同位素标记服务

该服务能够为通过大肠杆菌、酵母和SF9（杆状病毒）和哺乳动物细胞广范围表达的重组蛋白，提供稳定同位素。我们建立了独特的蛋白定制同位素标记服务平台。专业从事用稳定同位素标记蛋白，通常有13C，15N或者15N和13C的组合。

同位素标记蛋白服务的分步过程：1.克隆构建和生产，2.培养和表达优化测试，3.细胞生长和蛋白表达/纯化，4.蛋白体外表达，5. 同位素标记蛋白分析。

2.生物素标记服务

该服务在各种学术和工业领域中为客户提供定制生物素标记。能够满足生物素标记任何蛋白的期望，也可以开发了多种在体外生物素标记的方式。顾客能够为自己的应用选择特定的的生物素标记方式，避免活性损失。

3.其他多种标记服务

例如：荧光素FITC、荧光素RBITC、辣根酶HRP、碱性磷酸酶AP、胶体金标记Co-Au、Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7、APC、PE、Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 555、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 647等。

参考文献

[1] Stable Isotope Labeling with Amino Acid in Cell Culture."SILAC.Paydey Lab,n.d.Web.23 Nov 2011.

[2] Bunk,David.M."Expression of Stable Isotopically Labeled Proteins for Use as Internal Standards for Mass Spectrometric Quantitation of Clinical Protein Biomarkers."NIST,material measurement laboratory.The National Institute of Standards and Technology(NIST)is an agency of the U.S.Department of Commerce,30 Mar 2009.Web.19 Nov 2011.

[3] Marley,Jonathan,Min Lu,and Clay Bracken."A methode for efficient isotopic labeling and recombinent protein."Journal of Biomolecular labeling.20(2001):71–75.Print.

[4] German,James."The pattern of DNA synthesis in the chromosomes of human blood cells."Rockefeller university press.20.1 37–65.Print.

[5] Prakriya,Murali;Feske,Stefan;Gwack,Yousang;Srikanth,Sonal;Rao,Anjana;Hogan,Patrick G.(2006)."Orai1 is an essential pore subunit of the CRAC channel".Nature.443(7108):230–3.Bibcode:2006Natur.443..230P.

[6] Ho,Philip WL.;Tse,Zero HM.;Liu,HF.;Lu,S.;Ho,Jessica WM.;Kung,Michelle HW.;Ramsden,David B.;Ho,SL.(2013)."Assessment of cellular estrogenic activity based on estrogen receptor-mediated reduction of soluble-form catechol-O-methyltransferase(COMT)expression in an ELISA-based system".PLoS ONE.8(9):e74065.Bibcode:2013PLoSO...874065H.

[7] Minde,David P;Halff,Els F;Tans,Sander(2013)."Designing disorder:Tales of the unexpected tails".Intrinsically Disordered Proteins.1:5–15.

[8] 刘国霞.长效促红细胞生成素（LL-EPO）的放射性标记、分离纯化和鉴定[D].四川农业大学,2002.